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Hisのようなタグ トピック削除
No.11650-TOPIC - 2023/07/24 (月) 20:03:06 - tako
大量のタンパク質精製をタンデムタグで行う予定です。


1つはHisタグを用います。Hisタグだけでは、目的タンパク質が一部切断された分解物が含まれてしまうため、NとCのタンデムタグを用いる予定です。

しかし
Flagタグなどだと、精製用のFlagビーズが高価になってしまいます。
GSTだと、ビーズは高価でないのですが、タグが大きくなりすぎてしまいます。


Hisタグのように小さいタグで、コバルトビーズのような比較的安価なものに結合するお勧めのタグはありませんでしょうか?

ご教授いただけると助かります。
 
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(無題) 削除/引用
No.11650-4 - 2023/07/26 (水) 10:24:47 - Karas

メジャーどころの方がトラブルシュートに困らないので積極的にはお勧めしませんが、ケイ素に結合する短いタグがあります

SB7:RQSSRGR
(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7729015/)。

核酸精製用のシリカカラムに通すとメンブレンに結合し、アルギニンで溶出できます。ご参考までに。

(無題) 削除/引用
No.11650-3 - 2023/07/25 (火) 01:22:32 - おお
GSTだとThrombinなどで切断できるような仕組みもあります。特にGSTだけでなくほかのタグでも切断するというのは可能かと思います(MBPとか)。あとプロメガのHalo tagもそんな感じになっていたと思います。

短いもので抗体などを使わないとすると、
Streptavidin-binding tag (Strep-tag)でstreptavidinビーズで回収するとか。streptavidinビーズの値段はよくわかりませんが、そこそこ出回っていそうなので、、、Modified streptavidin binding tagに対してStrep-Tactinビーズを使うというのもありますね。

pETシリーズではS-tagが付いたものを売ってますね。S-proteinビーズが必要になりますが、値段等は把握しておりません。

少し面白いものとしては
Polyaspartate (Asp-tag、5–16 D Stretch)をつけて陰イオン交換で強いアフィニティーを持たすとか、Polyphenylalanine (Phe-tag、11xF) をつけて疎水性クロマトとか、Polycysteine (Cys-tag、4xC)でS-S結合を利用するものとかありますね。
PMCID: PMC4527311
https://www.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag


NEBはIMPACTというDTTでタグが切断されるというものを売っています。
https://www.neb.com/products/e6901-impact-kit#Product%20Information

(無題) 削除/引用
No.11650-2 - 2023/07/24 (月) 23:03:08 - SYBR master
HAT-tagとかはどうでしょうか。

https://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.php?unitid=U100004411

Hisのようなタグ 削除/引用
No.11650-1 - 2023/07/24 (月) 20:03:06 - tako
大量のタンパク質精製をタンデムタグで行う予定です。


1つはHisタグを用います。Hisタグだけでは、目的タンパク質が一部切断された分解物が含まれてしまうため、NとCのタンデムタグを用いる予定です。

しかし
Flagタグなどだと、精製用のFlagビーズが高価になってしまいます。
GSTだと、ビーズは高価でないのですが、タグが大きくなりすぎてしまいます。


Hisタグのように小さいタグで、コバルトビーズのような比較的安価なものに結合するお勧めのタグはありませんでしょうか?

ご教授いただけると助かります。

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