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(無題) 削除/引用 No.11664-8 - 2023/08/02 (水) 10:03:38 - 24 論文でも心筋に割れがある状態の染色画像とか時々ありますよね。 詳しくないですが、心筋を完全に保持するのは難しいのかな？

(無題) 削除/引用 No.11664-7 - 2023/08/01 (火) 14:45:43 - K 必ずしも２段階でなくてはいけないということではないです。拡散は温度依存なので、なるべくすみやかに組織内部に浸透できるようにすることを考慮して室温で一定時間振っています。ただPFA だと酵素等が失活していないこともあるので、あまりいつまでも室温で放置するのもいかがなものかとおもい、適当なところで4℃に移しています。 作成したパラフィンブロックはどの様に保存してますか。また作成後どのくらいで切片にしてますか。作成後かなり時間が経っていたり、4℃保存でなかったりすると、乾燥して切片がパサパサになったり割れたりして組織によっては良い切片が作りにくいです。

(無題) 削除/引用 No.11664-6 - 2023/07/31 (月) 08:11:09 - おお ミクロトームを使っているときに問題が起こっている可能性はないですか？歯があまりよくない状態とか。。。

(無題) 削除/引用 No.11664-5 - 2023/07/30 (日) 18:56:25 - まうす 皆様、ご意見ありがとうございます。 同じ様な症状になっている方は少なそうです やっぱり普通はスカスカにならないのでしょうか？ AA様 そこまで長く脱水する手法があるとは思いませんでした。 逆に、長すぎるのも良くないと考えていました。 K様 >>４％PFA/PBSに浸漬して室温で２~3時間程度シェーカーでゆっくり振盪する。 ４％PFA/PBS中でそのまま４℃で一晩静置する。 上記の通りありますが、2段階に分ける利点はあるのでしょうか？ あの様 あくまでも私はですが、パラフィン包埋でスクロース置換しているのは見たこと無いです。

(無題) 削除/引用 No.11664-4 - 2023/07/29 (土) 09:08:55 - あの 心筋の研究したことがありませんが、 PFA固定後にスクロース処理は不要なのですか？

(無題) 削除/引用 No.11664-3 - 2023/07/28 (金) 15:27:10 - K 心臓の切片は時々つくりますが、特に問題なく気鋭にできます。パラフィン、凍結いずれでも、心臓は組織が硬くしっかりしているので、他の組織よりもむしろ苦労なくきれな切片を得やすいです。 パラフィン切片作成は以下のようにしています 腹部大静脈を切ってから、左心室よりPBSを20ml程度ゆっくり注入して全身の血液除去。心臓の赤い色が抜けてうすいピンク〜白っぽくなる。 心臓摘出しPBSで軽く洗う。 ４％PFA/PBSに浸漬して室温で２~3時間程度シェーカーでゆっくり振盪する。 ４％PFA/PBS中でそのまま４℃で一晩静置する。 PBSで数回洗う。 心臓を専用のカセットにいれて自動包埋装置にセットし、プログラムで一連の工程を行う。 包埋工程の済んだ心臓をモルドに入れてパラフィンに沈め、低温で固める。（パラフィンブロック） これを保存するならば４℃で。 パラフィンブロックはなるべく冷えた状態でミクロトームにセットし、厚さ4マイクロメートル前後で、すみやかに薄切する。

(無題) 削除/引用 No.11664-2 - 2023/07/28 (金) 12:24:33 - AA 脳での話ですが、脱水の最初のアルコール(70%など)を３日とか１週間とか長く取るとパラフィン化による組織へのダメージを減らせたりします。

心筋がスカスカになる 削除/引用 No.11664-1 - 2023/07/28 (金) 09:29:37 - まうす 色々な組織のパラフィン切片を作っているのですが、心臓のパラフィン切片を作ると心筋がスカスカになってしまいます。 なお、固定は以下の方法でやっています。 ・4%PFAで灌流固定 ・24時間4%PFAで固定 ・24時間PBSで洗浄 もし対処方法があれば教えていただけないでしょうか？ よろしくお願いします！

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