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(無題) 削除/引用 No.11723-4 - 2023/08/23 (水) 09:34:42 - おお タンパク抽出についてなかなかレスがついていませんので、、、経験というよりはちょっと調べた感覚を書いておきます。 まず、強制的に過剰発現させた大腸菌には直接関係ないようなタンパクであれば、コールド・オスモティック・ショックがよく使われているようで、これで十分であるといえると思います。さらに手を加えたり工夫する方法は見られますが、その結果細胞内のタンパクもいくらか出てくるという感じではあります。 大腸菌の内在性のものについては抽出方法によって大きな差が出ることもあるようですが、それは生理的な条件でどのように他のタンパクや膜と相互作用しているかなどの影響が多いからだと思います。過剰発現してしまえば多少そういうことがあっても無視できますし。逆にあまり発現しない場合は試行錯誤が必要になるかもしれません。 以下が私が調べてみたものです。 doi.org/10.1016/0167-7012(89)90036-5 doi.org/10.2144/btn-2018-0135 doi: 10.1002/btpr.2999 10.1007/978-1-62703-245-2_22

(無題) 削除/引用 No.11723-3 - 2023/08/20 (日) 12:12:46 - おお >[Re:2] ペリプラズムさんは書きました : > 追加の質問で、上記方法で最後の遠心で残った沈殿 (ペリプラズム抽出液の残りの沈殿) に対して、適当なバッファーで懸濁し、超音波あるいは溶菌などの方法で破砕し、遠心した場合、その上清は可溶性タンパク質画分で、沈殿は不溶性タンパク質画分と言う認識で間違いないでしょうか。 その操作において沈殿は不溶性で上清は可溶性ですが、あなたが想定している不溶性、可溶性タンパクと一致しているかわかりません。また遠心力によっても回収できるものに幅があります。

(無題) 削除/引用 No.11723-2 - 2023/08/19 (土) 17:09:17 - ペリプラズム 追加の質問で、上記方法で最後の遠心で残った沈殿 (ペリプラズム抽出液の残りの沈殿) に対して、適当なバッファーで懸濁し、超音波あるいは溶菌などの方法で破砕し、遠心した場合、その上清は可溶性タンパク質画分で、沈殿は不溶性タンパク質画分と言う認識で間違いないでしょうか。

大腸菌ペリプラズム空間のタンパク質回収 削除/引用 No.11723-1 - 2023/08/19 (土) 17:00:43 - ペリプラズム 大腸菌を用いた異種タンパク質のペリプラズム空間への発現を検討しております。蛋白質科学会アーカイブの「大腸菌ペリプラズム抽出液の回収」では、リゾチームを用いる方法とコールド・オスモティック・ショックによる方法の2つが紹介されておりますが、いずれの方法においてもその回収の効率や別画分の混入などは大差ないでしょうか。いずれも筆を使ってマイルドに懸濁するようなので、操作誤差も多少はありそうですが。実際に経験されたことがある方がいらっしゃいましたら、何かアドバイスを頂きたいです。

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