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(無題) 削除/引用 No.11742-5 - 2023/08/26 (土) 15:35:25 - あの ロットが違ったら抗体との交差が変わった、市販のリコンビナント蛋白に遭遇したことはあります

(無題) 削除/引用 No.11742-4 - 2023/08/26 (土) 09:22:46 - おお まずそのリコンビナントは構造的にちゃんとフォールディングするように作られたものでしょうか？あるいは活性レベルで保障されたものでしょうか？ 抗体メーカーによっては抗体を作ったときの大腸菌で発現させた抗原を売っていることがありますが、そのたぐいのリコンビナントは正しいフォールディングや活性などはなくてもいいことが前提で作っていますので、あてになりません。そういう意味ではロット差とか大いに考えられると思います。加えて全長ではないことも多々あります。 正しいフォールディングや活性を保障したようなものを購入しているなら、購入先に使ったロットで同様のことが起きてないかなど聞きながら、違うロットを送ってもらうなり交渉するべきと思われます。

(無題) 削除/引用 No.11742-3 - 2023/08/26 (土) 08:47:10 - qq ドットブロットの場合、ニトロセルロースにrecombinant proteinをスポットして、抗体で検出という感じでしょうか？ ニトロセルロースへの固定化にロット差が影響するとは思わないのですが、ELISAプレートへの抗原固定化は、pHや溶媒などいくつかの条件で変わる可能性がありそうですから、抗原がそもそも固定化されていない可能性も考慮に入れるほうが良いかもしれない。 まあ、ドットブロットでもロット差があるとのことなので関係ないかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.11742-2 - 2023/08/25 (金) 22:48:58 - あ 購入したリコンビナントはQCをパスし同等である前提で購入しているので普通にはないですが、人が作ったものですから起こり得はします。 もう一度別のロットを買い直す、メーカーに問い合わせたりクレームを言う、もしくは別の試薬や手順を疑うのどれかでしょう。

recombinant proteinのlot差 削除/引用 No.11742-1 - 2023/08/25 (金) 21:30:00 - ち ELISAやドットブロットで使う抗原用にリコンビナントタンパク質を買ってます。今回ロットが変わったら反応性が非常に悪いのですが、高次構造とかがロット間で異なったりするのは普通にありますか。電気泳動しましたが純度はほぼ同等です。検討してる抗体は高次構造を認識します。

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