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チオレドキシン融合タンパク質 トピック削除
No.11763-TOPIC - 2023/09/05 (火) 11:14:04 - Protein
大腸菌異種タンパク質発現系において、チオレドキシン融合タンパク質に関しての質問です。
pET32, 48を用いてチオレドキシン融合タンパク質として発現させるとき、タンパク質は通常細胞内画分に発現されるという認識で間違いないでしょうか。メルクが出している「pET System Manual 第11版 日本語版」p23を見ると、trxA融合タンパク質がペリプラズムに発現しているようにも見えるのですが、どう言うことでしょうか。
初歩的な質問で申し訳ございませんが、ご教授いただければ幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.11763-4 - 2023/09/05 (火) 20:05:13 - Protein
Ggr様、回答ありがとうございます。
勉強になりました。

(無題) 削除/引用
No.11763-3 - 2023/09/05 (火) 18:32:07 - Ggr
大腸菌のチオレドキシンは細胞質内に発現しますが、内膜の内側面近傍の、ペリプラズムの細胞壁が途切れていて外膜と内膜が融合しているような特殊なサイトに局在する傾向があります。
このサイトは浸透圧変化に対する感受性が高いため、ペリプラズム局在タンパク質同様、浸透圧ショックによって、他の細胞質内タンパク質の混入を抑えつつ、チオレドキシンやその融合タンパク質を選択的に抽出することが可能です。

(無題) 削除/引用
No.11763-2 - 2023/09/05 (火) 12:56:35 - おお
DsbA•Tag™ かDsbC•Tag™がついたpET39, 40
pelB がついたpET20, 22, 25, 26, 27
がぺりプラズマ用ではないですか?

お示しのpETはアプリケーションはsoluble proteinになってます。

チオレドキシン融合タンパク質 削除/引用
No.11763-1 - 2023/09/05 (火) 11:14:04 - Protein
大腸菌異種タンパク質発現系において、チオレドキシン融合タンパク質に関しての質問です。
pET32, 48を用いてチオレドキシン融合タンパク質として発現させるとき、タンパク質は通常細胞内画分に発現されるという認識で間違いないでしょうか。メルクが出している「pET System Manual 第11版 日本語版」p23を見ると、trxA融合タンパク質がペリプラズムに発現しているようにも見えるのですが、どう言うことでしょうか。
初歩的な質問で申し訳ございませんが、ご教授いただければ幸いです。

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