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(無題) 削除/引用 No.11765-8 - 2023/09/08 (金) 15:44:03 - あああ ネガティブセレクションはできないのでしょうか

(無題) 削除/引用 No.11765-7 - 2023/09/08 (金) 13:17:51 - LPS おおさん、 TypLEもtrypsinと同じ部位を切るので、トリプシンが効けば簡単ですね。 emaさん、おおさん そうです。このキットを使用しています。抗体の濃度や種類を変えて試したのですが、今のところ、うまく行っていません。 ７７４Rさん、 残念ながら、エピトープは公開されてないようです。 ところで、競合ペプチドでの溶出、一般的にキレはいいのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.11765-6 - 2023/09/08 (金) 12:54:50 - 774R エピトープが分かっていて、且つ、アフィニティが適当な場合限定ですが、ペプチドで競合して抗体ごと外す方法はどうでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.11765-5 - 2023/09/08 (金) 12:30:50 - おお >[Re:4] emaさんは書きました : > ミルテニーのMACSビーズでREAlease Release Reagentが売られていますので、応用できないでしょうか。 > > https://www.miltenyibiotec.com/JP-en/products/macs-cell-separation/cell-separation-reagents/realease-microbeads.html 「これを回避するために、抗体との結合部位を切断可能なビーズを使ったりもしたのですが、」と書いてたのでそのことを言ってるのかなと勝手に思ってましたが、そうじゃないのかな。

(無題) 削除/引用 No.11765-4 - 2023/09/08 (金) 11:24:22 - ema ミルテニーのMACSビーズでREAlease Release Reagentが売られていますので、応用できないでしょうか。 https://www.miltenyibiotec.com/JP-en/products/macs-cell-separation/cell-separation-reagents/realease-microbeads.html

(無題) 削除/引用 No.11765-3 - 2023/09/08 (金) 03:26:42 - おお Removal of Cell-Bound Magnetic Beads Cells, which were bound to the column by magnetic bead-conjugated antibodies, were given a final wash with calcium-, magnesium-, and phenol red-free HBSS (Gibco, Life Technologies) and then eluted from the column with phenol red-free 1 ml 1× TrypLE Express (Gibco, Life Technologies). Cells were nutated with TrypLE Express at room temperature for 5 min, and then 100 μl FBS was added to inhibit the reaction. Cells were then pelleted and washed with PBE. doi: 10.7171/jbt.12-2302-003

(無題) 削除/引用 No.11765-2 - 2023/09/07 (木) 23:04:36 - LPS 除きたいのは、ビーズです。この目的で、抗体やビーズはどうなろうが構いません。

細胞に結合したビーズを除きたい。 削除/引用 No.11765-1 - 2023/09/07 (木) 23:01:57 - LPS 細胞の選別、精製に、磁性ビーズを用いた方法が広く使われています。 我々も、細胞表面上の特異抗体、ビーズの組み合わせで、純度的には99％以上の細胞を必要数，単離培養することには成功しているのですが、どうも、選別の際に使用したビーズが細胞の何らかの影響をあたえているらしく、細胞の反応性が変化しているようなのです。選別に使用した抗体のみの処理では問題がないので、ビーズが影響を与えているようです。このビーズは、除かない限りは、細胞に取り込まれて長期にわたって、細胞内に存在することもあるようです。これを回避するために、抗体との結合部位を切断可能なビーズを使ったりもしたのですが、純度、収量が著しく劣ります。 そこで、お伺いしたいのは、細胞表面に結合した抗体を細胞への影響は抑えて、除く方法がないかご存じでないか教えていただきたいのです。 とりあえず、トリプシンは試してみようと思っています。 ビーズはMyltenyi社のもので、化学修飾したデキストランではないかと思います。 以上、よろしくお願いいたします。

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