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(無題) 削除/引用 No.11767-4 - 2023/09/11 (月) 10:06:19 - ああ Ligationした側だとDNAの相性があるのですが、空ベクター側のプラスミドがへたってるとか長時間培養によるプラスミドの脱落、エアレーション関係くらいしか思いつかないですね… あとは別の人がやると上手くいくタイプの原因不明な手技的なものの可能性もあるかと思います transfection後に寒天プレートに蒔いてセレクションかけてから液体培養に入ってますよね？transfection後にそのまま前培養に入っていませんよね？ 特にアンピシリンはすぐ加水分解してしまうので耐性のない大腸菌が増えて、いざ本培養しようとすると増えないということはあります

(無題) 削除/引用 No.11767-3 - 2023/09/09 (土) 12:21:16 - 大腸菌 おおさま、回答ありがとうございました。 pETシステムを用いていますが、IPTG添加前の話です。

(無題) 削除/引用 No.11767-2 - 2023/09/09 (土) 04:29:55 - おお 本培養って誘導かけている？ タンパク合成に全ぶりになると増えないのもわからなくないけど。

大腸菌が液体培養で増えない 削除/引用 No.11767-1 - 2023/09/08 (金) 18:50:11 - 大腸菌 大腸菌を使った異種タンパク質の発現をしています。ネガコン用の空ベクターとインサートが挿入されている目的ベクターをそれぞれ大腸菌に形質転換し、前培養 (1晩) および本培養を行なっています。いずれも前培養では問題なく増えていましたが、本培養において空ベクターのみ増えません (増殖がかなり遅い?)。9 ~ 10時間培養しても濁度が0.4、0.5程度です。 考えられる原因をご教授いただければ幸いです。

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