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(無題) 削除/引用 No.11795-2 - 2023/09/22 (金) 16:21:47 - おお S tag beadsで精製すればどうだろう。 下流のプロテアーゼで切るか、以下の論文でマイルドな方法の溶出は3M MgCl2かな。他にもやりようがあると思うけど。例えばペプチドで溶出するとか。ー https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0076687900260655 リンカーが邪魔するような設計にはしてないだろうけど、どういうわけかインサートしたタンパクによってはニッケルカラムにつきにくくなるケースはある。 イオン交換とかで精製するとかもありといえばありだと思う。

Nusタンパク質の精製 削除/引用 No.11795-1 - 2023/09/22 (金) 13:26:34 - タンパク質 大腸菌を用いたタンパク質異種発現に取り組んでおります。 pETシステムを用いており、pET43.1aを使用した際、空ベクターでNusタンパク質のみを発現させた場合、その精製は可能でしょうか。厳密にはNusのC末端側にHisタグを含めて余分なアミノ酸配列がかなり存在していますが。 また、目的遺伝子をNusの下流に挿入し、SDS-PAGEで見た所、発現自体は確認できましたが、Hisタグ精製できずに困っております。もしかしたら、Nusと目的タンパクの間のHisタグが存在している (使用した制限酵素サイトはEcoR1/Xho1) ので、Hisタグがリンカー配列などで埋もれてしまい精製できなかった可能性を考慮しております。 NusのN末端側にもHisタグを付加してみる (pET44aのようなコンストラクトにする) ことを検討しておりますが、このほかに何か解決策がございましたら、ご教授いただけると幸いです。

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