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(無題) 削除/引用 No.11862-5 - 2023/10/20 (金) 09:24:03 - 774R Ni-NTA結合云々の前に、その分子の途中に勝手にループを入れた時にちゃんとフォールディングするかが心配で、それこそやってみないと分からないです。

(無題) 削除/引用 No.11862-4 - 2023/10/20 (金) 08:12:35 - qq 培養細胞で発現させたいというのは、培養細胞内で機能を見たいということなのか、それとも修飾が必須なタンパク質を発現させたいということなのでしょうかね。 配列内部のHisの塊は、構造形成に不利に働きそうな気がします。 構造が壊れていると、修飾もうまく入らないのではないかと想像します。 His-tagの付いていないコンストラクトも作っておくと良いかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.11862-3 - 2023/10/19 (木) 15:54:12 - ぽにょ alphafold2を走らせてみて、立体構造を見てみたらよいのではないでしょうか？ GS linkerは紐状になっているため、その直後のHis-tagはまず露出してるだろうと予測いたします。

(無題) 削除/引用 No.11862-2 - 2023/10/19 (木) 15:52:32 - おお https://www.nature.com/articles/srep20696 末端じゃないとできない理屈は無いと考えています。どう言う理由でできないと思われているのでしょうか。もしかしたらわたしの理解不足かもしれないのでその考えている理由を伺いたくおもいます。 上記の論文に限らず、大腸菌でリコンビナントタンパクを発現させるプラスミドのpETシリーズには、 可溶性を維持するためのアミノ酸配列–His x 6−マルチクローニングサイト、、、、というようなコンストラクトが色々とあります。 例えば https://www.emdmillipore.com/US/en/product/pET-32a-DNA-Novagen,EMD_BIO-69015?CatalogCategoryID=#documentation 末端でもタンパクによってはビーズにつきにくいこともあり、それは末端で無くても起こりうる事ですので、それとは混同しないと言う前提ですが。

分子内のHisタグについて 削除/引用 No.11862-1 - 2023/10/19 (木) 14:21:04 - ひたみん いつも勉強させてもらっています。 分子内His6タグについてコメントがいただければと思っています。 よろしくお願いします。 N末に50 kDaの分子、(G3S)2リンカー、ヒスタグ、FXa切断サイト、C末に20 kDaの分子というものを培養細胞で発現させたいです。 末端にあるHisタグなら、まずNi-NTAには結合するけど分子内だとやってみないとわからない、となりますでしょうか？ それとも、どこにあろうとHisタグなら、まずNi-NTAには結合するのでは、となりますでしょうか？ 忌憚のないご意見をいただけましたら嬉しいです。

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