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(無題) 削除/引用 No.12109-3 - 2024/01/29 (月) 10:54:41 - asan 実際はheat shockやelectroporationでは20%程度は2つ以上のプラスミドが入る大腸菌は生じるとされてます。 これがなぜ、1つのコピーを持つ大腸菌のコロニーになるかというと、大腸菌内のプラスミド不和合性と呼ばれる現象によるものです。ある大腸菌内で共存するプラスミドのうちどちらか一方を鋳型にのみ増幅する機構が存在するため、分裂を繰り返すことでどちらかのプラスミドは希釈されてなくなると考えられます。 詳しくは↓で説明されてます。 ttps://bitesizebio.com/2267/plasmid-retention/ ttps://blog.addgene.org/plasmids-101-plasmid-incompatibility ttps://www.sbj.or.jp/wp-content/uploads/file/sbj/8910/8910_yomoyama-2.pdf

(無題) 削除/引用 No.12109-2 - 2024/01/27 (土) 12:54:00 - おお 大腸菌に複数のプラスミドが導入されたとき、大腸菌が一種類のプラスミドを持つようになっても、全体では複数のプラスミドをもった集団になり得ます。また大腸菌に２種類ある（Oriが一緒でも）というのは片方が非常にドミナントになっているだけかもしれませんが、それはそのコロニーから更にシングルコロニーを拾って確認しないとわからないので、そういう話があったかどうか思い出せません。 プラスミドをConstructionする際プラクティカルには「コロニーはたった一種類のプラスミドを保持している」とほぼ言えるということだと思います。ただ、LigationごのTFで得られたコロニーをミニプレップで確認したあと更に増やすと目的のものが取れなかったばあいコロニーを拾って更に線画培養でシングルコロニーを拾って解決するということは極稀にあるようです。

形質転換についての基本的な疑問 削除/引用 No.12109-1 - 2024/01/27 (土) 12:21:59 - 大腸菌 教えてください。 大腸菌にligated productsの形質転換を行うと、LBアガー培地上で形成されるコロニーはたった一種類のプラスミドを保持している、と習いました。 ただ、いやいや、実はそんなことないよ、という論文も散見されます。 IPTG誘導性にGFP, RFP, YFPなどを発現するプラスミドの混和物を形質転換し、ある一つの大腸菌コロニーが複数の蛍光を発するデータを持ってそう報告されています。 ただ引用数が多いわけでもなく、以前として、「コロニーはたった一種類のプラスミドを保持している」と現場では言われているのではないかと思います。 どちらが本当なのでしょうか？

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