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(無題) 削除/引用 No.12202-7 - 2024/03/06 (水) 12:04:08 - こす 皆様 ご回答いただきありがとうございます。 コンピテントセル作成時の遠心です。 ゆるい方が良いのですね。 知りませんでした。 (むしろ細胞壁が壊れるくらいの方がcompetencyが上がるのかと勘違いしていました。) そのように実施したいと思います。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.12202-6 - 2024/03/06 (水) 06:37:49 - おお ゆるいほうがええと思うわ。 まあインタクトのプラスミドにしか使わないなら多少乱暴でもええと思うけど。

(無題) 削除/引用 No.12202-5 - 2024/03/06 (水) 01:02:57 - たこ コンピテントセル作製の時の遠心であれば、その後ほぐすときの物理的刺激(衝撃？）が原因になってよろしくないようです。 学生の時にやらかしてアホほどボルテックス＆ピペッティングしてようやく懸濁したやつは全然生えませんでした(抗生物質なしで）。 お作法通りにやったらちゃんと生えたんで、沈殿をほぐすときの刺激はかなり影響するんではなかろうかと思っています。 当然ながら再現性はかくにんしていませんが。

(無題) 削除/引用 No.12202-4 - 2024/03/05 (火) 14:41:05 - qq コンピを作るときの遠心ですよね？ 根拠はないけど、お作法通り低速遠心の方がいいんじゃない？

(無題) 削除/引用 No.12202-3 - 2024/03/05 (火) 12:17:25 - 774R ペレットをほぐす時に機械的刺激？ダメージ？を避けるためだと聞いたことがありますが、果たして大腸菌みたいな小さな物に影響があるのかはよく分からないです。 ただ、強い遠心の方が早く落ちるけども、再懸濁で時間がかかるので時短にはならない。むしろ緩いペレットの方が楽ですよ。

(無題) 削除/引用 No.12202-2 - 2024/03/05 (火) 12:02:24 - G25 どの操作段階でどの程度のボリュームを想定しているのでしょうか。 プラスミド精製なんかのときは高遠心力でも別に気にしないけど、 あとで培養に供する場合は、高遠心力、高圧力がかかるのは避けますけど。

大腸菌コンピテントセルの遠心 削除/引用 No.12202-1 - 2024/03/05 (火) 10:59:41 - こす ネット上の大腸菌コンピテントセルの遠心スピードを見ると、 3000 rpmから5000 rpmで10 min以上かけてゆっくり遠心している印象を受けるのですが、 12000 rpm-14000 rpmくらいで1 min - 5 min遠心するのだとワークしないのでしょうか。

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