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(無題) 削除/引用 No.12231-6 - 2024/03/21 (木) 15:34:28 - qq 両方の抗体があるのであれば、コントロール細胞をそれぞれの抗体でIPしてみると良いだろうと思います。 担体はProtein-G Dynabeadsを使っています。 tag抗体もそれぞれに複数あるでしょうから、なかなか難しいところでしょう。 私はmyc-tag抗体（エピトープ：[Q]SEEDL、Cell Signaling clone:9B11）を使っていますが、なぜかヘキソキナーゼが検出される以外にはこれといったタンパクを認めません。c-Mycも落ちてこないのはどういうことよ？ですが、組換えタンパク質のIPはそこそこ良いと思います。 他のmyc-tag抗体でうまくIPできた経験がありません。

(無題) 削除/引用 No.12231-5 - 2024/03/21 (木) 04:40:27 - おお >[Re:3] KDDIさんは書きました : > 自分もこれを見ました。 > ただ説明書きがないため、cross activityというのは、非特異的な接着という意味なのか、悩みました。 > > Flagの方がchargeしているから非特異的な結合はないと思っていたのですが、、、、 Using chemiluminescence as the detection method, no cross-reactivity has been observed in bacterial lysates. In mammalian lysates, a few cross-reactive proteins have been observed upon overexposure of blots. https://www.thermofisher.com/antibody/product/V5-Tag-Antibody-clone-SV5-Pk1-Monoclonal/R960-25 WBで関係ないバンドが検出されると書いてますね。

(無題) 削除/引用 No.12231-4 - 2024/03/19 (火) 17:32:21 - かかか あまり役に立たないレスですみませんが、両方でIPとMS解析して比較してはどうでしょうか。 私はFlagで網羅的MSをやったことがありますが（V5は無いのですが）、ビーズ吸着のノイズの解決が大変でした。抗体より担体の方が重要のように思います。

(無題) 削除/引用 No.12231-3 - 2024/03/19 (火) 11:26:07 - KDDI 自分もこれを見ました。 ただ説明書きがないため、cross activityというのは、非特異的な接着という意味なのか、悩みました。 Flagの方がchargeしているから非特異的な結合はないと思っていたのですが、、、、

(無題) 削除/引用 No.12231-2 - 2024/03/19 (火) 08:40:49 - おお V5 ... Limitations: Potential cross-reactivity in mammalian systems. https://www.abcam.com/proteins/epitope-tags#V5 抗体や条件次第なのかもしれませんが、上記のような記述をどこかで見たことがあったので敬遠したことがあります（Massを使う実験ではありませんでしたけど）。FLAGは３XFLAGなどアフィニティーを増強したものも出回ってますのでやりやすいような気がします。 FLAGはDが多く負電荷にかなり偏っているのは場合によっては気になるかもしれません（特に膜のトポロジーが絡むと）。親水性で蛋白の構造を邪魔せず外に提示されることが期待できるというのはあるかもしれません。

V5 タグとflagタグどちらが免疫沈降に向いていますか。 削除/引用 No.12231-1 - 2024/03/19 (火) 07:52:46 - KDDI タイトル通りなのですが、V5 タグとflagタグどちらが免疫沈降に向いていますか。 最近のはやりは、V5なのでしょうか。Massで網羅的に結合タンパク質を同定する計画です。

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