BioTechnicalフォーラム [経済的に細胞フリーのウイルス液調製方法]

経済的に細胞フリーのウイルス液調製方法

No.12436-TOPIC - 2024/07/10 (水) 16:49:36 - レンチ

いつも勉強させていただいております。

現在293T細胞にてレンチウイルスを作製しております。
培養上清を0.45 umフィルター滅菌し、それをウイルス液として感染させたい細胞に作用させています。

この度、ウイルスを複数 (10種類) 作らねばならず、10個のフィルターを使うのがとても忍びないです。

そのため、培養上清を12000 g, 10 minして293T細胞を除去し、その上清を慎重に取るというやり方で感染をおこなうことを試していますが、残念ながら10個中、1個に293Tのコンタミが起こり、すぐさまドミナントに293Tが増えてしまいました。

どうしても10個を揃えた上で実験を行わねばならず、再度10個の感染をやり直しです。

そこで先生方にお聞きしたいのですが、フィルターを使わずにどうにか細胞フリーのウイルス液を調製する方法をご教示いただきたいです。
何卒よろしくお願いいたします。
　

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No.12436-7 - 2024/07/11 (木) 17:03:36 - おお

>[Re:6] レンチさんは書きました :

>
> 凍結融解は目から鱗でした。
> 普通にウイルス液を一度凍結すれば293Tはまず間違いなく死にますでしょうか？12000gでも死なないものがいるので、質問させてもらいました。
>
>

そんなに以外に思うのが不思議ですが。。。普通にウイルスは凍結保存するでしょうから。。。

>間違いなく死にますでしょうか？

保証はしません。

なんならトランスウェルの上からウイルスかける？

てか、安いところで、一個200円もしないようだけど。ビーエム機器とか関東化学とかググったら見つかったけど。ナカライでも200円ちょっとかな。

それに比べて血清入り培地でいくらかかってるかけいさんしてみ？もう既に一回やって千円以上使ってる計算にならんか？

(無題)

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No.12436-6 - 2024/07/11 (木) 12:07:55 - レンチ

おお先生、mp先生

ありがとうございます。
今はまだ条件検討の段階でして、スモールスケールでのウイルス調製をしています。
今後10個のうち、目的にそう変異体を選び出し、それで大量調製してフリーズストックをできればと思っています。

予備実験にフィルターを使えるような経済的に裕福なラボではないので難しいところでした。

凍結融解は目から鱗でした。
普通にウイルス液を一度凍結すれば293Tはまず間違いなく死にますでしょうか？12000gでも死なないものがいるので、質問させてもらいました。

(無題)

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No.12436-5 - 2024/07/11 (木) 01:53:37 - おお

>[Re:4] mpさんは書きました :
> 一度凍結融解させればいいんでないかい？
> タイターもそれほどさがらんでしょう。

タイターについて多分そんなに下がらないだろうと思いながらも、凍結については書くのを敬遠してました、、、でも選択肢ですね。

(無題)

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No.12436-4 - 2024/07/10 (水) 21:56:40 - mp

一度凍結融解させればいいんでないかい？
タイターもそれほどさがらんでしょう。

(無題)

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No.12436-3 - 2024/07/10 (水) 17:10:34 - おお

と書きながら、感染させたい細胞がネオマイシン以外の薬剤耐性を持っていればその薬剤を入れるのはアリかもしれません。

それか、PEGで沈殿させるとか、、、