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(無題) 削除/引用 No.1247-2 - 2012/12/16 (日) 12:13:48 - MP hPBMCは刺激後IL-2を入れていても、２〜３週間で増殖は止まります。したがってご覧になられている現象はごくごく一般的なものです。なぜ止まるのか？テロメアの短縮にしては、期間が短すぎるし、hTERTを強制発現したT cellでもやはり増殖が止まるという報告もあり、テロメア長が原因ではなさそうです。p21やInk4aの発現が上がるという報告もあります。 OKT3で再刺激はやったことがないのでどうなるかはわかりませんが、何となくアポトーシスになりそうな気もします。もしかしたらCD28刺激も同時にやればうまくいったりもするのでしょうか？

hPBMCs/anti-CD3による増殖について 削除/引用 No.1247-1 - 2012/12/13 (木) 16:58:07 - wannabeadrtcell 平素はお世話になっております。 hPBMCsからOKT3で誘導したT cellへの遺伝子導入を計画しています。 導入のschemeとしては、 hPBMCsをFicoll Paqueで分離し、OKT3, retronectin-coated plateで前刺激したものに、amphotropic retrovirusをretronectin存在下で感染させました。 今回初めてだからなのか、それとも私のPBMCsが良くなかったのか、ポジコンのGFPを指標に感染効率は2%ほどでした（Day3 post infection）。発現させたいベクターにはneoRが付いていますので、neoで選択後、2週間ほどしましたが、きちんとneoRを持つ細胞が濃縮されてきました。 ここで質問させてください。 retrovirus感染後は、IL-2とTリンパ球用の基礎培地で基本増やしています。 が、neoで選択しなかった細胞でも２週間ごろになると「生きてはいるのだけど、」増殖していないように思えます。quiescent状態というのでしょうか。 ここでみなさまに教えていただきたいのは、IL-2だけでは増殖に不十分なのでしょうか？ もう一度OKT3で刺激をすれば、増えてくれるのでしょうか？最初の感染効率が悪いのでなんとか増えてくれないかなとIL-2に期待していたのですが。。 最終的には遺伝子導入されたTcellを使ってin vitroでのtumoricidal活性を見たいと思っています。 みなさまのコメントいただけますと幸甚です。よろしくお願いします。

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