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IP-Westernでのバックグラウンドの解消 トピック削除
No.1267-TOPIC - 2012/12/19 (水) 09:57:53 - IP-Western
あるウサギ抗体で免疫沈降し、同じ抗体でウエスタンする(IP-Western)と、レーンのバックグランドが高くて困っています。おそらくは、IｇGが認識され、それが高分子量までなぜか尾を引いていると思われます。

私の場合、一般的にどの抗体（３−４種）でも起こります。しかし、メーカーのFigを見ると、まったくそんなことはないようです（たとえばBethyl社）。

変性抗体を認識しない抗体をウエスタンに使う以外に、なにかコツがありましたらお教えください。
　
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(無題) 削除/引用
No.1267-3 - 2012/12/19 (水) 15:47:49 - IP-Western
TSさん、ありがとうございます。そうですよねー。そういった報告たくさん見ます。ちなみにLoadingバッファーでサンプルをボイルしていると思われますが、何分ぐらいやられていますか？　IgGの変性が足りないのかなと思いまして。

＞Heavy or light chain specificな二次抗体とかもあり。

勉強になります。

(無題) 削除/引用
No.1267-2 - 2012/12/19 (水) 11:25:04 - TS
あまり尾を引くというのは起きませんね。
どかっとIgGが該当分子量付近に見えてしまいますが。
普通にやっているだけで、工夫というのちょっと思いつきません。

変性抗体を認識しない抗体と同様ですが、
Heavy or light chain specificな二次抗体とかもあり。

本質からずれまますが、
変性抗体を認識しない抗体、たぶん業者に頼めばサンプルもらえますよ。

IP-Westernでのバックグラウンドの解消 削除/引用
No.1267-1 - 2012/12/19 (水) 09:57:53 - IP-Western
あるウサギ抗体で免疫沈降し、同じ抗体でウエスタンする(IP-Western)と、レーンのバックグランドが高くて困っています。おそらくは、IｇGが認識され、それが高分子量までなぜか尾を引いていると思われます。

私の場合、一般的にどの抗体（３−４種）でも起こります。しかし、メーカーのFigを見ると、まったくそんなことはないようです（たとえばBethyl社）。

変性抗体を認識しない抗体をウエスタンに使う以外に、なにかコツがありましたらお教えください。
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