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培地の浮遊物 トピック削除
No.1384-TOPIC - 2013/01/27 (日) 06:27:50 - Atail
培養細胞の種類によって浮遊物(ゴミ?)が生じ易い、生じにくいという違いはあるのでしょうか?

普段200xで顕微鏡観察しているのですが、先日他ラボで蛍光顕微鏡を借りた際、400xで観察しました。同じDMEM、同じトランスフェクション試薬を使ったのですが、293Tのプレートでは小さな浮遊物がたくさん見られ、MEFでは殆ど見られませんでした。

最初は293Tのコンタミを疑ったのでヘキスト33342染色してみたのですが、浮遊物は一切染まりませんでした。ただ、30分の染色で細菌のDNAがヘキストで染まるかどうかは、不確かです(固定操作なしに大腸菌を4時間染色して蛍光観察している論文は見つけましたが)。
 
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No.1384-4 - 2013/02/09 (土) 15:26:38 - Atail
コンタミプレートを見たことが無いのですが、やはり培地の色が異状を示すものなのですね。浮遊物が死んだ細胞から出るというのに合点がいく気がします。というのも、ご指摘の通り同じ試薬同じ条件で293TとMEFにそれぞれトランスフェクションしたのですが、MEFのトランスフェクション効率が数%しかありませんでした。293Tでは50%以上のトランスフェクション高率でしたが、即ちよりtoxicだったのかと思われます。

(無題) 削除/引用
No.1384-3 - 2013/01/28 (月) 10:23:12 - ~
書かれている内容からすると、同じ条件で異なる細胞へのトランスフェクションしたのでしょうか。
細胞によってトランスフェクション時の死に易さは異なりますし、
細胞が死ぬと浮遊物が見られることがありますね。

(無題) 削除/引用
No.1384-2 - 2013/01/27 (日) 08:41:29 - おお
トランスフェクションの試薬は物によっては低倍率でも何かドット状の物が見えたりしますよねェ。。。

細胞の死んだものならヘキストダイなどで染まりますし、バクテリアなら培養ですでに大変なことになっているでしょうし、、、

培地の浮遊物 削除/引用
No.1384-1 - 2013/01/27 (日) 06:27:50 - Atail
培養細胞の種類によって浮遊物(ゴミ?)が生じ易い、生じにくいという違いはあるのでしょうか?

普段200xで顕微鏡観察しているのですが、先日他ラボで蛍光顕微鏡を借りた際、400xで観察しました。同じDMEM、同じトランスフェクション試薬を使ったのですが、293Tのプレートでは小さな浮遊物がたくさん見られ、MEFでは殆ど見られませんでした。

最初は293Tのコンタミを疑ったのでヘキスト33342染色してみたのですが、浮遊物は一切染まりませんでした。ただ、30分の染色で細菌のDNAがヘキストで染まるかどうかは、不確かです(固定操作なしに大腸菌を4時間染色して蛍光観察している論文は見つけましたが)。

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