Bio Technical フォーラム

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RAW264.7でのおすすめのリポフェクション試薬 トピック削除
No.1411-TOPIC - 2013/02/04 (月) 15:02:13 - Macrophage
ルシフェラーゼアッセイを行うため、RAW264.7へプラスミドDNAのリポフェクションを試みています。
が、いまのところうまくいっていません。
Lipofectamin、FugeneHDで色々と条件を検討してみましたが、GFPベクターで確認したtransfection 効率はせいぜい10%程度です。

HEK293、293T細胞で、同じプラスミド、試薬を用いて実験するとtransfection効率は約80%はいきますので、試薬類、基本的な実験手技には問題はないものと思っています。


RAW264.7で使えるリポフェクション試薬として、ネットで検索するとjetPEI-mac等々色々でてきますが、どの試薬がよかったとか、何かおすすめのリポフェクション試薬はありますでしょうか。

それとも、RAW264.7に対してはリポフェクションよりもAmaxa等のエレクトロポレーションを行うべきでしょうか。

よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.1411-3 - 2013/02/04 (月) 20:20:23 - PYK
これのマクロファージ用が良かったと聞いたことがあります。
http://www.funakoshi.co.jp/node/10658
ご参考に。

(無題) 削除/引用
No.1411-2 - 2013/02/04 (月) 17:55:09 - う
色々やってみましたが、
リポフェクション試薬では
ほとんど大差なく、あまり効率は良くなかった
というのが私の感想です。

まぁ、最近、RAWに導入しましたみたいな
プロトコールを示している試薬(何かは忘れました)もありますが、
(ネットで検索するとすぐ出ると思います)
それも似たようなものでした。

Amaxaは試したこと無いです。

RAW264.7でのおすすめのリポフェクション試薬 削除/引用
No.1411-1 - 2013/02/04 (月) 15:02:13 - Macrophage
ルシフェラーゼアッセイを行うため、RAW264.7へプラスミドDNAのリポフェクションを試みています。
が、いまのところうまくいっていません。
Lipofectamin、FugeneHDで色々と条件を検討してみましたが、GFPベクターで確認したtransfection 効率はせいぜい10%程度です。

HEK293、293T細胞で、同じプラスミド、試薬を用いて実験するとtransfection効率は約80%はいきますので、試薬類、基本的な実験手技には問題はないものと思っています。


RAW264.7で使えるリポフェクション試薬として、ネットで検索するとjetPEI-mac等々色々でてきますが、どの試薬がよかったとか、何かおすすめのリポフェクション試薬はありますでしょうか。

それとも、RAW264.7に対してはリポフェクションよりもAmaxa等のエレクトロポレーションを行うべきでしょうか。

よろしくお願いします。

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