訂正ですが、先ほどのプライマー云々はreverse-transciption後のPCRの話です(お分かりだったと思いますが、念のため訂正しておきます)。
私は、東洋紡ReverTra Ace qPCR RT Master mix (gDNA removerが入ってないもの)を使用していますが、反応時間15分で、3kbpまでのcDNAは問題なくクローニングできております。
RT反応の酵素を変えてもクローニングしたい産物の絶対量が少なければ、クローニングすることは難しいと思います。また、量が十分あるとしても、PCR酵素との相性もあると思います。これらの際には、PCR酵素の変更やnested PCRの検討も必要かと思います。
本題からそれましたので、この辺で失礼します。 |
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