Bio Technical フォーラム

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miRNA(短いやつ)の検出 トピック削除
No.1677-TOPIC - 2013/04/25 (木) 02:48:48 - おお
みなさんはどうしてますか?

ノーザン、PCR、そのたいろいろでてますが、、、RIで検出するもので、noneRIに移行できそうなものとかあればいいかなぁと漠然におもったりもします。
 
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(無題) 削除/引用
No.1677-5 - 2013/05/02 (木) 08:12:32 - 組織
それほど経験が多いわけではないですが、アレイの後でリアルタイムPCRをしています。PCRは既製品の逆転写プライマーとTaqmanプローブの組み合わせを使って、メーカーの指示通りやってます。今のところ、アレイとPCRの結果はおおむね一致してる感じです。

DIG標識のLNAプローブで in situ hybridizationもやりましたが、短いからなのか、局在が少しぼやけ気味な印象です。メソッドはあまりいじってません。

(無題) 削除/引用
No.1677-4 - 2013/05/02 (木) 04:07:55 - おお
>[Re:3] emaさんは書きました :
> (お金に余裕があるなら)miRNAのアレイをやってしまってます。
> 定量、はリアルタイムも開始基準等があるからもうすこし考えないといけないとは思いますが。

>[Re:2] ふみさんは書きました :
> 逆転写時にポリAをつける酵素も入れておいて、リアルタイムPCRで検出。
> この方法だと感度は高いけれど信頼性はノザンの方がずっと高いと思います。
>

ありがとうございました。ノーザンで問いあえずは始めようかと思いました。アレイは、、、特定のものしか見ないので、、、アレイをすると結局は確認でPCRとかノーザンとかしないとという印象があるのですが、、、

アレイで 削除/引用
No.1677-3 - 2013/05/01 (水) 17:52:12 - ema
(お金に余裕があるなら)miRNAのアレイをやってしまってます。
定量、はリアルタイムも開始基準等があるからもうすこし考えないといけないとは思いますが。

RT-PCRで 削除/引用
No.1677-2 - 2013/05/01 (水) 10:11:06 - ふみ
逆転写時にポリAをつける酵素も入れておいて、リアルタイムPCRで検出。
この方法だと感度は高いけれど信頼性はノザンの方がずっと高いと思います。

miRNA(短いやつ)の検出 削除/引用
No.1677-1 - 2013/04/25 (木) 02:48:48 - おお
みなさんはどうしてますか?

ノーザン、PCR、そのたいろいろでてますが、、、RIで検出するもので、noneRIに移行できそうなものとかあればいいかなぁと漠然におもったりもします。

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