Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

マウス肝のMPO(myeloperoxidase) assay トピック削除
No.1688-TOPIC - 2013/04/29 (月) 06:57:40 - マウス肝 MPO
マウス肝中のMPO activityを測定するべく、
sigmaのMPO activity assay kitを用いて
プロトコール通りに assayを試みているのですがうまくいきません。

frozen肝組織をbufferに入れ、homogenize、sonicationして遠心、
上清を使用しているのですが、おそらくこのpreparationの仕方に問題があるのではないかと思っております。
できあがりの上清はうすい褐色調で、これをassayに用いていますが
MPO活性がまったくdetectできませんでした。

どなたか肝組織中のMPOassayを実際に経験された方がおられましたら、
sample調整時の注意点を教えて頂けると幸いです。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



2件 ( 1 〜 2 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.1688-2 - 2013/04/30 (火) 20:27:39 - 月詠
ご承知だとは思いますけど、ミエロペルオキシダーゼは主に好中球のアズール顆粒内に貯蔵されている酵素で、好中球が異物などを貪食・消化する際に活性が認められます。
したがって、肝臓内にMPO活性が観察されるということは、すなわち、肝炎や脂肪肝などで肝臓に炎症が生じ、肝組織中に好中球が集積していることを示唆しています。

凍結融解後の肝ホモジネート中にMPO活性が検出されないということですけど、可能性としてはおおまかに、
(1)そもそも炎症が生じていなくて肝臓内に好中球が浸潤していない(か量的に不十分)
(2)肝臓内に好中球は集積しているが、ホモジネート上清中に抽出できていないか、凍結保存あるいは抽出操作中に失活してしまっている
(3)ホモジネート上清中に(酵素自体は)抽出できているが、活性を示す条件が整っていないか(カルシウムイオンやその他補因子が足りないなど)、活性を阻害する物質が内在している
などが考えられます。

それぞれの可能性を否定するための対照群をおいて実験することをお勧めしますけど、最初から(2)の可能性が高いと推論される根拠がなにかあるのでしょうか。
またどのような肝炎モデルを選ばれているのでしょうか。その条件で病理組織的には十分炎症像が観察されているのでしょうか。

マウス肝のMPO(myeloperoxidase) assay 削除/引用
No.1688-1 - 2013/04/29 (月) 06:57:40 - マウス肝 MPO
マウス肝中のMPO activityを測定するべく、
sigmaのMPO activity assay kitを用いて
プロトコール通りに assayを試みているのですがうまくいきません。

frozen肝組織をbufferに入れ、homogenize、sonicationして遠心、
上清を使用しているのですが、おそらくこのpreparationの仕方に問題があるのではないかと思っております。
できあがりの上清はうすい褐色調で、これをassayに用いていますが
MPO活性がまったくdetectできませんでした。

どなたか肝組織中のMPOassayを実際に経験された方がおられましたら、
sample調整時の注意点を教えて頂けると幸いです。

2件 ( 1 〜 2 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。