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細胞に使える糖鎖切断酵素（グリコシダーゼ） トピック削除
No.1699-TOPIC - 2013/05/01 (水) 16:03:29 - aq
細胞膜表面に存在する糖鎖修飾タンパクの、糖鎖を切断したいと考えています。
細胞膜画分をとってくるぶんにはグリコシダーゼを用いた方法がとれますが、例えば、生きた細胞の細胞膜表面の糖鎖を切ることができる酵素をご存じないでしょうか。
ヒドラジンはもとより、EndoH,PNGaseFなど主要な酵素はプロトコルに熱処理があり使えませんでした。
　
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(無題) 削除/引用
No.1699-3 - 2013/05/01 (水) 23:12:45 - ttt
おおさんに同意で、試してみるしか無いと思います。
もっとも、EndoHは主にcis-Glogi以前の高マンノース型を認識するので効果はあまり期待出来ないと思いますが。

(無題) 削除/引用
No.1699-2 - 2013/05/01 (水) 16:51:57 - おお


https://www.neb.com/products/p0702-endo-h#tabselect0
To deglycosylate a native glycoprotein, longer incubation time as well as more enzyme may be required.

変性させた方が効率がいい可能性はたかいですが、そもそも、酵素の生理的に働いているときに変性してからきっているわけではありませんよね。。。

この酵素はばっふぁーはクエン酸でpH5あたりになっていてていちょうなようえきなのでバッファーも工夫がいるかもしれませんけど。

カタログだけでなく文献検索などしてみてもいいかもしれませんよ。

細胞に使える糖鎖切断酵素（グリコシダーゼ） 削除/引用
No.1699-1 - 2013/05/01 (水) 16:03:29 - aq
細胞膜表面に存在する糖鎖修飾タンパクの、糖鎖を切断したいと考えています。
細胞膜画分をとってくるぶんにはグリコシダーゼを用いた方法がとれますが、例えば、生きた細胞の細胞膜表面の糖鎖を切ることができる酵素をご存じないでしょうか。
ヒドラジンはもとより、EndoH,PNGaseFなど主要な酵素はプロトコルに熱処理があり使えませんでした。
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