Bio Technical フォーラム

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1次元目ゲルをウェスタンするとバンドが消えていく トピック削除
No.170-TOPIC - 2012/02/17 (金) 16:44:50 - PAGE
論文も検索してみたのですが、1次元目のゲルのウェスタンは
なかなか見つからなかったので質問致します。

1次元目のゲルに時間差でサンプルを泳動しウェスタンすると、
泳動時間の長いサンプルほどウェスタンでシグナルが弱くなる
という問題で困っています。
以下に実験の条件を書いていますので、皆さんの考えを
お教えください。

1次元目AUT-PAGE
ウレア・酢酸・トリトンのゲルで〜9時間泳動してヒストンの
分離を調べます。

2次元目SDS-PAGE
1次元目が短時間の泳動でもウェスタンではまだ検出できたことが
ありません。

ウェスタン
酢酸MtOHバッファー PVDF

CBB染色
ウェスタンででるものも出ないものもヒストンのバンドが
はっきりと確認できていません。
 
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読まれているとは思いますが 削除/引用
No.170-3 - 2012/07/17 (火) 16:51:06 - 今さらかな
http://sbs.umkc.edu/waterborg/reprints/1987_Waterborg%20AnalBiochem162-430-1987.pdf

(無題) 削除/引用
No.170-2 - 2012/02/18 (土) 15:35:13 - み
1次元目のAUT-PAGEをやったことないし、論文でも見たことないのですが、
時間とともにゲル中に分散・拡散してるような印象。
分散して検出限界以下になっているのかなあ。

そもそも2次目を終えた時点で蛋白サンプルはゲルの中に展開されているのでしょうか?
CBB, 銀染色などで確かめたのでしょうか?
また、その時のバンド・スポットはどれくらいシャープなのか?

それらを確認してからtransferやwesternの問題を考えるべきかと

1次元目ゲルをウェスタンするとバンドが消えていく 削除/引用
No.170-1 - 2012/02/17 (金) 16:44:50 - PAGE
論文も検索してみたのですが、1次元目のゲルのウェスタンは
なかなか見つからなかったので質問致します。

1次元目のゲルに時間差でサンプルを泳動しウェスタンすると、
泳動時間の長いサンプルほどウェスタンでシグナルが弱くなる
という問題で困っています。
以下に実験の条件を書いていますので、皆さんの考えを
お教えください。

1次元目AUT-PAGE
ウレア・酢酸・トリトンのゲルで〜9時間泳動してヒストンの
分離を調べます。

2次元目SDS-PAGE
1次元目が短時間の泳動でもウェスタンではまだ検出できたことが
ありません。

ウェスタン
酢酸MtOHバッファー PVDF

CBB染色
ウェスタンででるものも出ないものもヒストンのバンドが
はっきりと確認できていません。

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