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(無題) 削除/引用 No.181-8 - 2012/02/23 (木) 21:04:47 - Harmonia 細胞をPBSで洗うのが足りないときに、出たことがあります。 理由が分かっているのはこれくらいで、理由不明のバンドは沢山経験しています。

(無題) 削除/引用 No.181-7 - 2012/02/23 (木) 18:35:12 - WB 色々ご意見ありがとうございます。 でないはずのバンドとは「本体の分子量とは異なるところにバンドが出た」という意味でした。 大変わかりにくい説明で申し訳ありませんでした。 みなさんはそのような経験ありませんか？

とりあえず… 削除/引用 No.181-6 - 2012/02/21 (火) 19:06:03 - 月詠 その「出ないはずのバンド」がどういう意味なのか説明していただかないと、みなさん、お答えのしようがないように思うのですけど… Beclin-1を遺伝的に欠損している細胞株だから、絶対に陽性反応は「出ないはず」という意味でしょうか？ それとも本来の分子量とは異なるありえない位置にバンドが出現するという意味なのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.181-5 - 2012/02/21 (火) 08:21:03 - う その条件は、 出ないはずのバンドがでるような条件では無いと思います。

(無題) 削除/引用 No.181-4 - 2012/02/20 (月) 20:30:04 - 通りすがりですよ 状況がよくわかりませんが、細胞株の中にはBeclin1が欠損しているためオートファジーが起きない（おきにくい？）と云われる系もあるようです。 そういう系でしたら、抗体の認識部が変わって異常なバンドが出る可能性もあるのかもしれません。 あくまで私的な考察ですが。

(無題) 削除/引用 No.181-3 - 2012/02/20 (月) 19:46:39 - Harmonia でないはずのバンドが出たのだから、「出ないはず」が間違っていたのでしょうね。 それ以外のことは、実際に実験をした者でないと、想像の域を出ないので、議論が発散します。

(無題) 削除/引用 No.181-2 - 2012/02/20 (月) 17:53:43 - ~ >出ないはずのバンド まず、出ない"はず"と言えるだけのどのようなデータがあるのでしょうか？ また、これはネガコンなのにバンドが出たのでしょうか？ それともポジコンで、目的の位置以外にバンドが出たのでしょうか？ 細胞株のコンタミ、分解産物、スプライシングバリアント、株特異的なホモログの発現等は考えられるのでは？

WBのバンドについて 削除/引用 No.181-1 - 2012/02/20 (月) 17:05:42 - WB いつもお世話になっております． 現在細胞株のBeclin-1の発現量を測定するためにWBを行っています． やっとの思いでバックグラウンドや1次抗体，2次抗体などの条件設定が完了しきれいなバンドが出たのですが，なぜかある一種類の細胞については出ないはずのバンドが出現してしまいました． これはどのようなことが原因と考えられるのでしょうか？ blockingは ４℃5％　skim　milk　in　PBSでover　night 1次抗体の処理は　４℃1％　skim　milk　in　PBSでover　night 2次抗体の処理は　室温1％　skim　milk　in　PBSで1時間で行っています． 1次抗体の処理時間が長いなど関係するのでしょうか？ ご教授お願いいたします．

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