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(無題) 削除/引用 No.196-3 - 2012/02/24 (金) 18:51:47 - 低酸素マウス 状況の説明が足らず申し訳ありません。 現在行ってるのは、マウスを2週間の低酸素暴露（帝人の低酸素暴露装置にて10% O2をチャンバー内で暴露、他気体組成は評価しておらず）させた後に、チャンバーから出し、腹腔内麻酔、肺血管の潅流、肺の摘出、コラゲナーゼ溶液での分散を行っています。肺の摘出までに約1時間程度は経過しているかと思われます。そこから細胞数のカウントを行い、フローサイトメトリーの染色を開始し、表面染色後にR&DやNovusのanti-HIF1α abで細胞内染色を行っているという流れになります。 HIFの検出につきましてアドバイスをお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.196-2 - 2012/02/24 (金) 08:33:35 - Harmonia 具体的な作業の流れを書かないと、答えようが無い。 スタートはマウスそのものですか？ （だとしたら、バラバラの細胞を得るまでの手技？） 培養したマウスの細胞ですか？ （ならば、培養容器の容量？培養液の量？） フローサイトメトリーで観察したいシグナルは、どうやって作りますか？ 抗体？ 化学薬品の反応？ GFP等のマーカー？ チャンバーの気体濃度調製法は？ CO2とN2? 各気体の濃度は？

低酸素暴露によるＨＩＦ発現 削除/引用 No.196-1 - 2012/02/23 (木) 15:38:27 - 低酸素マウス 低酸素暴露マウスにおけるHIF-1αの発現をフローサイトメトリーで確認しようとしていますが、hypoxia 2weekにてnormoxiaと差がありません（抗体も2種類試しましたが結果は同様です）。HIFは分解が早いとされていますが、低酸素チャンバーから出し細胞分散に至るまでに分解されてしまうのでしょうか。また、その他に考えられる原因がありますでしょうか？

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