現在マウスのBMDCを用いた実験を行っています。
BMDCの培養は、マウス骨髄細胞浮遊液を作製し、RBCを溶血後、10ng/mLのrmGM-CS入りRPMI(10%FBS+50uMβ-ME)で2日間培養後(2x10^6個/2mL/well 12well plate)全ての培地を一回除去しています。その後、2日おきに新しい10ng/mL rmGM-CSF入りMediumを用いてMedium changeを行い、6日目に浮遊している細胞及び弱付着系細胞を採取しています。その細胞を新しい10ng/mL rmGM-CSF入りMediumに再懸濁し、一晩ペトリディッシュで培養します。次の日に付着していない細胞を回収し、MACSを用いてCD11c+細胞をポジティブセレクションにて採取してきました。
その細胞を用いて各種刺激物質による刺激実験を行っています。
細胞密度は、5x10^5cells/500uL/well (24well plate)です。
刺激(たとえばLPS)したもの及びControlで3時間後観察するとマイクロプレートに付着してしまっています。(GM-CSFは添加しています)
BMDCは刺激した場合、及び刺激しない場合でもマイクロプレートに付着してしまうのでしょうか?
BMDCの刺激実験を行う場合は、マイクロプレートはnon-treatmentのものを用いないといけないのでしょうか?(こちらを用いても付着しています)
どうぞ教えて下さい。 |
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