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(無題) 削除/引用 No.2018-16 - 2013/05/24 (金) 01:31:11 - おお もうボチボチ来たことかもしれない。。。とおもうので凍結しておいたらといったのだが。。。

(無題) 削除/引用 No.2018-15 - 2013/05/23 (木) 15:40:00 - う 「う」という適当な名前ですが、勝手に使われると 気持ち悪いです。（つまり、前の書き込みは私ではありません） これでだけだと失礼なので、コメントを。 BCAキットが来るまで実験する、とありますが、 このキットは結構使われているので、 在庫の用意もあると思います。 なので、 注文してからBCAのキットが来るまで そんなにかからないと思うので、 待った方が早いと思います。 急がば回れ。

(無題) 削除/引用 No.2018-14 - 2013/05/23 (木) 14:52:43 - う ブラッドフォード試薬やBCA試薬のないラボにCBBがあるんですかね。

(無題) 削除/引用 No.2018-13 - 2013/05/23 (木) 14:40:02 - おお ブラッドフォード試薬を作るには高濃度のリン酸がいるからなぁ。。。だから作れるといっても、その場で作れないかもと思ったんだけど。。。つくれたのかな?

(無題) 削除/引用 No.2018-12 - 2013/05/23 (木) 01:22:20 - ぷろ クマシーブリリアントブルーG250！ なるほどです。 そうだ。プレートリーダーも探しにいかないと。

(無題) 削除/引用 No.2018-11 - 2013/05/22 (水) 14:20:23 - おお わたしもCBBとかラボにないのかなぁとか、、、おもったくちですが さんぷる凍結しておくのが一番いい気がしてきた。。。 膜にどろっぷして、まくをCBBやponceau Sとかで染めても量は見積もれるとはおもう。

(無題) 削除/引用 No.2018-10 - 2013/05/21 (火) 22:30:38 - あっqwせdrftgyふじこlp ちょっと研究室の棚か引き出しを見てほしい。クマシーブリリアントブルーG250はあるかな？R250じゃなくてGの方。あればブラッドフォールド 法で比色定量できる。試薬の作り方、測り方はググればどっかに出てるはず。

(無題) 削除/引用 No.2018-9 - 2013/05/21 (火) 07:59:19 - maru BCAキットを待ったほうがいいと思うのですが。 届くのにそんなに時間がかかるのでしょうか。それか他のラボから分けてもらえないのですか？ 吸光度ではかるとデータを比べるのが面倒だと思うのですが。

(無題) 削除/引用 No.2018-8 - 2013/05/21 (火) 01:21:21 - おお めやすはかきました。あなたのばあいでもおそらく1-2ug/ulあたりじゃないでしょうか。こんふるにちかければ2ug/ulあたりまでなっているかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.2018-7 - 2013/05/21 (火) 01:10:53 - ぷろ >[Re:2] おおさんは書きました : > けっこうぶれるというか。それとtriton x-100は紫外に非常につよい吸収を持っていますので、ベースラインが振り切れている状態に近いと思います。あきらめて違う方法をとった方がいいと思いますが、、、 そうなんですか。ブレルのは困りますね。 それでも目安になるだけでも助かるので、どなたか、お願いします。 ちなみに293細胞6cm dishを300 ulに溶かしてます。

(無題) 削除/引用 No.2018-6 - 2013/05/21 (火) 01:10:33 - 直輝 ライゼートはコロイド溶液だから （光の散乱）＞（タンパク質や核酸などの光の吸収） であり、吸光度を測定することはできません。 大腸菌みたいに、濁度（OD600)を使った方がマシじゃないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.2018-5 - 2013/05/21 (火) 00:55:17 - おお >5u/mlは ->5ug/ul

(無題) 削除/引用 No.2018-4 - 2013/05/21 (火) 00:54:12 - おお たとえば10cmディッシュで1mlにとかしても5u/mlはいかないと思います。

(無題) 削除/引用 No.2018-3 - 2013/05/21 (火) 00:24:29 - くぁwせdrftgyふじこlp 蛋白質濃度ならば、何個くらいの細胞（or どのくらいのディッシュサイズと枚数からの細胞）をどのくらいの量のライシスバッファーで溶かして得た蛋白質溶液なのかという情報が必要とおもう。 あるいは動物の培養細胞だと細胞１個あたりの総蛋白質量は多めに見積もってせいぜい数ngだから、液量をもとにそれで概算してもいいかもしれない。triton xだとヒストンなどの核蛋白質のあるものは溶けないのでその分少なくなるかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.2018-2 - 2013/05/21 (火) 00:24:28 - おお たしかむかし280nmの吸収でtotal lysateの蛋白量を図ろうと思ったことはあるのですが、なかなかうまくいきませんでした。けっこうぶれるというか。それとtriton x-100は紫外に非常につよい吸収を持っていますので、ベースラインが振り切れている状態に近いと思います。あきらめて違う方法をとった方がいいと思いますが、、、

細胞ライセートタンパクをA280で濃度測定 削除/引用 No.2018-1 - 2013/05/20 (月) 22:40:49 - ぷろ 新しいラボに来たら、細胞生物学的な実験が少ないためか、BCAなどによるタンパク質濃度を測定する試薬などがそろっていません。現在、準備中です。 とりあえずBCAキットが来るまで、他の方法で実験しようと思ってます。nanodropがあるので、280nmでの吸光度測定はできます。これで各サンプル間の濃度をそろえようと思っております。 293, HeLaなどの細胞をTritonを含むバッファーで溶かして、15000rpm 30min後の上精をWBやIPに使用する予定なのですが、もちろんこの上精には核酸も含まれているため、正確なタンパク質濃度をA280では測定できません。 どなたか、時間のある方で、ちょうど培養細胞のタンパク質濃度をBCAなどで測定している方がいましたら、ちょろっと、nanodropなどでそのライセートのA280 (1Abs=1 mg/ml, Baseline 340nm)による濃度がどれくらいなのか教えていただけないでしょうか？Nanodropなら、ブランクとって、サンプルアプライして、A280で測定するだけでよいです。だいたいの目安がわかるだけで助かります。 ちなみに私のサンプルはA280で測定すると約5-10mg/ml です。

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