Bio Technical フォーラム

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NEBのQ5 high fidelity DNA polymeraseってどうなんでしょうか トピック削除
No.2166-TOPIC - 2013/07/03 (水) 11:52:32 - pp
日常的に数種類のＫＯマウスのgenotypingをしているのですが、
かかりにくいものがいくつかあります。
特にそのなかでも、あるＫＯマウスはPCR productがＫＯ用、ＷＴ用共に
1kb以下なのにも関わらず酵素はTAKARAのLA taqじゃないと増えず、
programも94℃/2min-(94℃/20sec-60℃/7min)x30cycle-72℃/10minと
ちょっと変わっています。
私が今の研究室に来る前に外注で作ったマウスでPCRの条件も外注先から
教わったものらしいです。
exon1周辺でのＰＣＲなので構造上PCRがかかりにくいことは想像できるのですが、
それにしてもかかりずらかったり、プログラムが特殊だったりで
もっと簡便に確実に増幅できないものかと思っています。

去年NEBからQ5 DNA polymeraseなるものが出たとのことで
フレコミではGCコンテンツに影響されないとか、高次構造をとるような配列や
プロモーター、エンハンサー等のPCRにおススメと書かれていました。
値段もそこまで高くないので試してみたいのですが、
もし使ったことあるあるいは他の酵素と比較したことあるという方
いらっしゃいましたら感想をお聞かせください。
　
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(無題) 削除/引用
No.2166-2 - 2013/07/04 (木) 10:10:46 - A
非常に増幅いいですよ。
GCリッチでLA taqで伸ばせなかったターゲットが伸びたりと。
ただ、苦手な配列もあるようで完璧とは言えません。
正確性はかなり高いですね。

なんにしても、難しいターゲットにはよいプライマーでないとダメです。

NEBのQ5 high fidelity DNA polymeraseってどうなんでしょうか 削除/引用
No.2166-1 - 2013/07/03 (水) 11:52:32 - pp
日常的に数種類のＫＯマウスのgenotypingをしているのですが、
かかりにくいものがいくつかあります。
特にそのなかでも、あるＫＯマウスはPCR productがＫＯ用、ＷＴ用共に
1kb以下なのにも関わらず酵素はTAKARAのLA taqじゃないと増えず、
programも94℃/2min-(94℃/20sec-60℃/7min)x30cycle-72℃/10minと
ちょっと変わっています。
私が今の研究室に来る前に外注で作ったマウスでPCRの条件も外注先から
教わったものらしいです。
exon1周辺でのＰＣＲなので構造上PCRがかかりにくいことは想像できるのですが、
それにしてもかかりずらかったり、プログラムが特殊だったりで
もっと簡便に確実に増幅できないものかと思っています。

去年NEBからQ5 DNA polymeraseなるものが出たとのことで
フレコミではGCコンテンツに影響されないとか、高次構造をとるような配列や
プロモーター、エンハンサー等のPCRにおススメと書かれていました。
値段もそこまで高くないので試してみたいのですが、
もし使ったことあるあるいは他の酵素と比較したことあるという方
いらっしゃいましたら感想をお聞かせください。
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