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免疫動物が同じ一次抗体の二重染色 トピック削除
No.2301-TOPIC - 2013/08/16 (金) 15:33:34 - pp
いつも参考にさせていただいております。

現在、蛍光の免疫染色をやっているのですが、
同じ細胞で発現するかどうかの検討を二重染色でやりたいと思っています。
ただ、現在ラボで所有している2種類の一次抗体がどちらもラットIgGです。

そこで片方の一次抗体(ここではA)をビオチン標識することを考えています。
まず抗体Bで通常の免疫染色を行い、そのあとanti-ratの二次抗体をよく洗って、
ビオチン化抗体Aを反応させ、蛍光標識ストレプトアビジンで染めるという手順です。

このような染色の経験のある方いらっしゃいましたらご教授くださいませんか。
 
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(無題) 削除/引用
No.2301-4 - 2013/08/18 (日) 22:06:22 - pp
kodamataro 様

zenon標識について調べてみました。
簡便に組織染色で使えるくらいの蛍光強度が得られるみたいですね。
ただratのものは今のところないみたいです・・・
染め分けたいratの一次抗体がたくさんあるのでratのがあれば
3色のを購入しようかと思っていましたが。。。

現在ラボに、ちょうどビオチン化した抗体とストレプトアビジンalexa594だったので
投稿してみました。
一応染めてみたのですが、内在性ビオチンのブロッキングをすっかり忘れて
変な染色パターンになってしまいましたが、何回か条件検討すれば
いけるかもしれません。

情報どうもありがとうございました。


名無し 様

そうですよね。
ただ、手持ちにビオチン化抗体とストレプトアビジンalexa594があったので
とりあえずそれで染め分けられればと思い投稿しました。
以前Cy3だかCy5のラベリングをやったことがあるのですが、
フローサイトには使えたものの、組織切片では二次抗体による増幅がないからか
通常の免染で得られたようなシグナルが得られなかった経験があります。
最近のラベリングキットの効率や強度についてまた情報収集して
よさそうなものがあれば検討してみます。
よい商品などありましたらまた教えてください。

(無題) 削除/引用
No.2301-3 - 2013/08/18 (日) 12:29:06 - 名無し
抗体Aと抗体Bをそれぞれ違う蛍光物質で標識して2重染色するとかどうよ。ていうかそれが一番簡単じゃね。

(無題) 削除/引用
No.2301-2 - 2013/08/17 (土) 09:57:45 - kodamataro
ZENON標識という手法があったと記憶しています。

私は使ったことがないのでご参考まで。

免疫動物が同じ一次抗体の二重染色 削除/引用
No.2301-1 - 2013/08/16 (金) 15:33:34 - pp
いつも参考にさせていただいております。

現在、蛍光の免疫染色をやっているのですが、
同じ細胞で発現するかどうかの検討を二重染色でやりたいと思っています。
ただ、現在ラボで所有している2種類の一次抗体がどちらもラットIgGです。

そこで片方の一次抗体(ここではA)をビオチン標識することを考えています。
まず抗体Bで通常の免疫染色を行い、そのあとanti-ratの二次抗体をよく洗って、
ビオチン化抗体Aを反応させ、蛍光標識ストレプトアビジンで染めるという手順です。

このような染色の経験のある方いらっしゃいましたらご教授くださいませんか。

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