Bio Technical フォーラム

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BL21のグリセロールストック トピック削除
No.2312-TOPIC - 2013/08/22 (木) 01:26:34 - 千葉
BL21大腸菌を用いてタンパク質の大量発現•精製を行っております。

通常、グリセロールストックは大腸菌を20%グリセロールにケンダク後、凍結保存し、使用する場合は、数ulほどを液体培地に加えております。

しかしタンパク質発現の場合は、グリセロールにケンダクした大腸菌を100ulほどに小分けにして保存しておき、使用する場合は100ulすべてを液体培地に加えて使用した方が、タンパク質発現が悪くならないと聞きました。

みなさんは、実際にどのような方法で保存しておりますか?
 
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No.2312-5 - 2013/08/22 (木) 22:04:34 - 千葉
みなさま、コメントありがとうございます。

一本グリセロールストックから何度も起こすのは良くなさそうですね。
もしくは、ちゃんとした発現を望む場合は、作らない方が良いぐらいなのですね。

(無題) 削除/引用
No.2312-4 - 2013/08/22 (木) 20:46:53 - Harmonia
形質転換した大腸菌の保存方法を話題にしているのですよね?

ぼくは、組換え大腸菌での保存はしていません。
使用の都度、形質転換しています。

(無題) 削除/引用
No.2312-3 - 2013/08/22 (木) 10:47:54 - おお
グリセロールストックは変になることがまあまああるので基本していません。過去ログにもいろいろ議論があると思います。

(無題) 削除/引用
No.2312-2 - 2013/08/22 (木) 09:01:07 - 波平
私の研究室では,BL21のコロニー1つを爪楊枝でとり,10 µlの10%グリセロールに懸濁しています。これを多数作成して,-80℃で凍結して保存しております。培養するときは,この10μl全量を5 mlのLB培地に植菌して前培養しています。

BL21のグリセロールストック 削除/引用
No.2312-1 - 2013/08/22 (木) 01:26:34 - 千葉
BL21大腸菌を用いてタンパク質の大量発現•精製を行っております。

通常、グリセロールストックは大腸菌を20%グリセロールにケンダク後、凍結保存し、使用する場合は、数ulほどを液体培地に加えております。

しかしタンパク質発現の場合は、グリセロールにケンダクした大腸菌を100ulほどに小分けにして保存しておき、使用する場合は100ulすべてを液体培地に加えて使用した方が、タンパク質発現が悪くならないと聞きました。

みなさんは、実際にどのような方法で保存しておりますか?

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