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(無題) 削除/引用 No.2345-6 - 2013/09/05 (木) 23:46:18 - EcoRI 皆さま貴重なご意見有難うございます！ 774様、AP様、ぽぽ様が教えてくださった方法は知りませんでした。 またmon様、AP様、ベクターを教えてくださり有難うございます。 何れかの方法で試してみたいと思います。 有難うございました！

(無題) 削除/引用 No.2345-5 - 2013/09/05 (木) 17:51:14 - ぽぽ 使いたいけどNotI、SacIがあるベクターをNotI、SacIで切って、 好みの制限酵素サイトを入れつつnotIとsacIをつぶすようなオリゴと それに相補的なオリゴを買ってアニーリング、ライゲーションさせるのが コスト的にも時間的にもいい気がします。 こんな感じです。 ベクター　　　　　　　インサート　　　　　　　　　ベクター **********GC CCGG@@*************@AGCT C********** **********CGCCGG @@*************@ TCGAG********** @はNotI、SacIでリカットできないように違う塩基に変えてつぶします。 中はある程度は好きなように作れるのでお勧めです。

(無題) 削除/引用 No.2345-4 - 2013/09/05 (木) 09:36:17 - AP pUC8, pUC9 まあ、適当なベクターのNot1, Sac1 サイトを潰すのも難しくないかと。 たとえばpBluescript2だったら、Sac1とNot1（あるいはNot1とEcoR1の間にある認識配列を切る酵素、たとえばBamH1, Sma1, Xba1など）で消化して、T4 DNA polで平滑化、ligation、transformationして得る。

(無題) 削除/引用 No.2345-3 - 2013/09/05 (木) 06:22:28 - mon 古典的で今はほとんど使われませんが、pBR322

(無題) 削除/引用 No.2345-2 - 2013/09/05 (木) 06:11:48 - 774 NotIで切断してT4で平滑化してself-ligation、SacIでも同様に。 こうすれば一応、ご希望のベクターになるのかなと。 質問の主旨とは違うので、役に立たなかったらすみません。

制限酵素サイトから目的のベクターを探すサイト 削除/引用 No.2345-1 - 2013/09/05 (木) 01:13:33 - EcoRI お世話になっております。 現在EcoRIがマルチクローニングサイトにあり、NotIおよびSacIで切れないベクターを探しております。どなたかご存知でしたら教えて頂けないでしょうか。NotIとSacIがメジャーな制限酵素ですので調べたベクターのほぼすべてにそれらが入っています。pcr8（invitrogen）のベクターはNotI,SacIが入っていませんが出来ればそれ以外のベクターがありましたら教えて頂きたいです。 このような制限酵素サイトから目的のベクターを探すサイトは存在するのでしょうか？よろしくお願いいたします。

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