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(無題) 削除/引用 No.2349-23 - 2013/09/08 (日) 03:12:36 - KF 多数有望なご意見をいただきありがとうございます。 とりあえず、現在いただいたご意見をもとにトラブルシューティングしてみます。

(無題) 削除/引用 No.2349-22 - 2013/09/08 (日) 03:03:44 - KF >[Re:18] おおさんは書きました : > まあ代理店の、実際出入りする人がこまわりが聞く場合はありますが、今回の場合は代理店も違うロットをもってきてということになるかと。。。代理店が実際使っているほかのラボとかの話とか情報収集はかれらもやる(やれるので)、若干違った情報もえられるかもしれません。ただこれも出入りしている人の技量にもよるとおもいます。 トライしないよりはトライしたほうがよさそうなのでやってみます。

(無題) 削除/引用 No.2349-21 - 2013/09/08 (日) 03:00:51 - KF >[Re:17] おおさんは書きました : > で、トランスファーや、WBにどのように影響したのでしょうか。 トランスファー後、ポンソで染めると大きな気泡の部分は抜けているように見えます。また多少汚くなっている部分も見られます。 しかし、トランスファー後は、私自身の泡抜きの技術もありますので、本当にそのせいなのかは不明です。

(無題) 削除/引用 No.2349-20 - 2013/09/08 (日) 02:56:05 - KF >[Re:11] おおさんは書きました : > まあ今回はメーカーも違うロットを提供してますしねぇ。。。メーカーもメーカーの提示している条件でワークすることは確認しているでしょうし。。。そういう現象があったという報告がいつもあるような状態なら物の改善や適切なトラブルシューティングもできているでしょうけど。。。 > > 電圧や電流はチェックしましたか?そういう情報も必要ですよ。 100vで流してどれだけの電流だったとか。 ご指摘の通り、電源のトラブル、電気泳動槽のトラブルの可能性は十分に考えられます。良い時と悪い時の電流などの数値をチェックしてみます。

(無題) 削除/引用 No.2349-19 - 2013/09/08 (日) 02:52:22 - KF > 泳動条件で、高温になるようなことがあれば、かつ、ロットによって脱気が少々不完全なら、当然起こると思います。 > > 私はかなり高温（４０-５０度？）で意図的に泳動することがあるので、そういったことがたまにあります。メーカーは違いますが。 > > ゲルろ過のカラムなどと同じことかと思います。 おそらく、私が使用している条件も高温になっている状態だと思われます。脱気の可能性は十分に考えられると思われますが、業者さんがどのようにゲルを作成されているのかはわからないので、相談する必要があるかと思われます。

(無題) 削除/引用 No.2349-18 - 2013/09/08 (日) 02:52:10 - おお > ていうか、自作するか、別のメーカーから買えばいいだけの話だけど。 代理店を介して聞くと対応してもらえるというのは、おもしろい情報ですね。こんど行ってみます。 まあ代理店の、実際出入りする人がこまわりが聞く場合はありますが、今回の場合は代理店も違うロットをもってきてということになるかと。。。代理店が実際使っているほかのラボとかの話とか情報収集はかれらもやる(やれるので)、若干違った情報もえられるかもしれません。ただこれも出入りしている人の技量にもよるとおもいます。

(無題) 削除/引用 No.2349-17 - 2013/09/08 (日) 02:47:40 - おお >[Re:12] KFさんは書きました : > \> 泡だけでしょうか?温度そのた異常は見られませんでしたか? > > サンプルやマーカーは全く流れないんでしょうか? > > > マーカーは流れますが、その途中で気泡が多数出現します。実際にどの段階で気泡ができ始めているのかは、まだ泳動途中のどの段階で気泡ができているのか観察していないのですが、流れ方からみると終わりの段階なのかもしれません。気泡は特に上側に集中してます。温度に異常が特別にあるようには感じられません。 > で、トランスファーや、WBにどのように影響したのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.2349-16 - 2013/09/08 (日) 02:47:21 - KF > 代理店の人にデータの写真（同時に泳動して問題なかった12%と泡が出た10%の両方）を渡して、代理店を通して「うちのユーザーさんからこんなトラブルが報告されてるんだが』みたくメーカーに聞いてもらったらいいかもしれない。別のメーカーの話だけど、抗体がなんか変で、直にメールで「これって、どうよ」みたく聞いたときは、型どおりの、あれな対応だったけど、代理店の人が聞いてくれたら、わりと親身に対応してくれたことある。聞くルートによって、メーカーの方の対応してくれた人が違うのかもしれない。 > > ていうか、自作するか、別のメーカーから買えばいいだけの話だけど。 代理店を介して聞くと対応してもらえるというのは、おもしろい情報ですね。こんど行ってみます。 自作のゲル、別のメーカーは電気泳動槽の規格もあるので、要検討のひつようがあるかと思われます。

(無題) 削除/引用 No.2349-15 - 2013/09/08 (日) 02:42:30 - KF > アクリルアミドゲルなので、私の経験と大分異なりますが、 > アガロースゲルを冷蔵保存していたら電気泳動中に、 > ゲル内に気泡（空隙？）ができたことがありました。 > 何枚やっても。 > > その時はアガロース粉末を替えることで、 > 解決しましたが、それ以降不必要に作り置くことは、 > やめました。 一応プレキャストゲルの使用期限をこえることはしてはいませんが、劣化している可能性は注意する必要があるかと思われます。

(無題) 削除/引用 No.2349-14 - 2013/09/08 (日) 02:38:32 - KF > 気泡が出るという現象と関係するかどうかわかりませんが、 > 冷蔵保存中に凍結してしまったために、ゲルが劣化することがあります。 > 4℃の冷蔵庫でも場所によって氷点下にあることもありますし、また、輸送中の冷蔵、保冷材が効きすぎてという可能性もあります。 冷蔵庫の凍結の可能性を業者さんにも指摘されたことがあります。冷蔵庫の中段で保存していることやロットによって違いがあることから可能性としては低いかもしれませんが、十分に注意する必要があると考えています。 輸送中の出来事だとしたらはもはやこちら側ではどうしようもないですね。

(無題) 削除/引用 No.2349-13 - 2013/09/08 (日) 02:33:59 - KF > Bioradのゲルは何百枚か流していますがそんなトラブルは今までないですね。 > > 周りでも聞いたことがないです。 > > なんか特別なサンプルとか泳動条件なんでしょうか？ 特別な条件では流していません。もちろんこれまでには特に問題がなかったのですが、最近続けて記載したような状態が起こりました。

(無題) 削除/引用 No.2349-12 - 2013/09/08 (日) 02:31:37 - KF \> 泡だけでしょうか?温度そのた異常は見られませんでしたか? > サンプルやマーカーは全く流れないんでしょうか? > マーカーは流れますが、その途中で気泡が多数出現します。実際にどの段階で気泡ができ始めているのかは、まだ泳動途中のどの段階で気泡ができているのか観察していないのですが、流れ方からみると終わりの段階なのかもしれません。気泡は特に上側に集中してます。温度に異常が特別にあるようには感じられません。

(無題) 削除/引用 No.2349-11 - 2013/09/08 (日) 02:29:06 - おお まあ今回はメーカーも違うロットを提供してますしねぇ。。。メーカーもメーカーの提示している条件でワークすることは確認しているでしょうし。。。そういう現象があったという報告がいつもあるような状態なら物の改善や適切なトラブルシューティングもできているでしょうけど。。。 電圧や電流はチェックしましたか?そういう情報も必要ですよ。 100vで流してどれだけの電流だったとか。

(無題) 削除/引用 No.2349-10 - 2013/09/08 (日) 00:16:44 - 脱気 泳動条件で、高温になるようなことがあれば、かつ、ロットによって脱気が少々不完全なら、当然起こると思います。 私はかなり高温（４０-５０度？）で意図的に泳動することがあるので、そういったことがたまにあります。メーカーは違いますが。 ゲルろ過のカラムなどと同じことかと思います。

(無題) 削除/引用 No.2349-9 - 2013/09/07 (土) 15:04:22 - 名無し 代理店の人にデータの写真（同時に泳動して問題なかった12%と泡が出た10%の両方）を渡して、代理店を通して「うちのユーザーさんからこんなトラブルが報告されてるんだが』みたくメーカーに聞いてもらったらいいかもしれない。別のメーカーの話だけど、抗体がなんか変で、直にメールで「これって、どうよ」みたく聞いたときは、型どおりの、あれな対応だったけど、代理店の人が聞いてくれたら、わりと親身に対応してくれたことある。聞くルートによって、メーカーの方の対応してくれた人が違うのかもしれない。 ていうか、自作するか、別のメーカーから買えばいいだけの話だけど。

(無題) 削除/引用 No.2349-8 - 2013/09/07 (土) 11:25:01 - Pumpkin アクリルアミドゲルなので、私の経験と大分異なりますが、 アガロースゲルを冷蔵保存していたら電気泳動中に、 ゲル内に気泡（空隙？）ができたことがありました。 何枚やっても。 その時はアガロース粉末を替えることで、 解決しましたが、それ以降不必要に作り置くことは、 やめました。

(無題) 削除/引用 No.2349-7 - 2013/09/07 (土) 10:52:48 - AP 気泡が出るという現象と関係するかどうかわかりませんが、 冷蔵保存中に凍結してしまったために、ゲルが劣化することがあります。 4℃の冷蔵庫でも場所によって氷点下にあることもありますし、また、輸送中の冷蔵、保冷材が効きすぎてという可能性もあります。

(無題) 削除/引用 No.2349-5 - 2013/09/07 (土) 06:19:22 - モモ Bioradのゲルは何百枚か流していますがそんなトラブルは今までないですね。 周りでも聞いたことがないです。 なんか特別なサンプルとか泳動条件なんでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2349-4 - 2013/09/07 (土) 02:27:57 - おお 泡だけでしょうか?温度そのた異常は見られませんでしたか? サンプルやマーカーは全く流れないんでしょうか? ゲルのバッファーとえいどう相のcompatibilityはどうですか?

(無題) 削除/引用 No.2349-3 - 2013/09/07 (土) 02:23:52 - KF ご指摘のとおりbio radのプレキャストゲルを使用しております。 一度こちらが泡が出ることを報告し、写真もとったのですが、そのような報告はないのでとりあえずロットの違うものと取り替えますといわれ（写真も見てもらえませんでした）、特に気にしてもらえませんでした。

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