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ありがとうございます 削除/引用 No.2435-4 - 2013/10/10 (木) 10:56:04 - まや 独り言 さん、わかりやすいご説明ありがとうございました！ Hajime さん、そのような方法もあるのですね。機会があれば試してみたいと思います。 色々とご教示いただきありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.2435-3 - 2013/10/08 (火) 23:54:22 - Hajime 私の場合はBDPhosflowやCell signalingのAntibodyでやっています。 理由としては造血幹細胞でWBするにはサンプルの量が少ないためです。 造血幹細胞をFACSsortしてからWBしても、もともとの細胞数が少なすぎてシグナルがでません。 http://www.bdbiosciences.com/ca/hotlines/phosflow_act_kit/index.jsp

(無題) 削除/引用 No.2435-2 - 2013/10/08 (火) 18:53:58 - 独り言 > > また、ごくまれにFACSでリン酸化シグナルを見ている論文も見受けられますが、ほどんどがWestern blotを用いているのは、何か利点があるのでしょうか？ > WBなら分子量からシグナルが本物だとわかりますが、 FACSはトータルのシグナルをみているだけなので、WBでいうと、上とか下のほうの非特異的なバンドもシグナルになってしまい、本当にその抗体の抗原のシグナルを拾えているのかわからないからです。

ウェスタンに必要な血液量、FACSでのリン酸化測定 削除/引用 No.2435-1 - 2013/10/08 (火) 12:29:06 - まや いつも参考にさせていただいています。 人（疾患あり）の末梢血からCD4陽性T細胞を採取して、STAT、SOCSの活性化を調べたいと思っています。 一般的にはウエスタンブロットでリン酸化を測定すると思いますが、血液量はどの程度あれば実験に必要なタンパクが取れますでしょうか？ FACSで表面抗原を見る実験も同時に行うことになっており、血液量が限られています。 また、ごくまれにFACSでリン酸化シグナルを見ている論文も見受けられますが、ほどんどがWestern blotを用いているのは、何か利点があるのでしょうか？ 素人の質問で申し訳ありませんが、よろしくお願い致します。

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