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(無題) 削除/引用 No.2454-6 - 2013/10/16 (水) 16:37:35 - AP >PMSFとかみたく水溶液中では不安定でそんなに長持ちしないのもあるので、入れてるから安心というわけでない。 一応、補足を入れておきます。 PMSFは水溶液中での半減期が短い(数十分だったか）ですが、一度セリンプロテアーゼを反応してしまったPMSFは共有結合によって安定に保たれ、不可逆的に酵素活性をブロックします。したがって、最初に入れたPMSFで反応可能なセリンプロテアーゼがすべてブロックされてしまえば、その後、あらたにプロテアーゼが混入してこない限り（器具、試薬からのコンタミ？　あるいはlysisが進んで新たに放出されるような？）、PMSFは分解してしまっても効果は変わりません。このあたり、RNaseに対するDEPCなんかと感覚が同じですね。 もちろん、必要とあらば、要所要所の段階で、PMSFを新しく加えていくということも普通に行われます。

(無題) 削除/引用 No.2454-5 - 2013/10/16 (水) 00:18:11 - TS 細胞とか組織のライセート？ 普通は冷凍保存でしょう。 酵素活性とかを見るつもりで、一晩くらいならとも思うが、 私は絶対にしませんね。

(無題) 削除/引用 No.2454-4 - 2013/10/15 (火) 23:30:43 - おお 凍結することによって失活したりするものはあるかもしれないけど、たいていは-80度だな。。。

(無題) 削除/引用 No.2454-3 - 2013/10/15 (火) 22:02:15 - 名無し 個々の蛋白質はそれぞれ性質がさまざまなので精製された蛋白質の場合なら、４Cで安定で、凍結融解で、凝集したり失活しやすいものなら、４C保存がいいのかもね。一方、4C長期保存だと不安定で失活しやすいとかなら−３０〜ー８０Cがいいのかもね。 組織や細胞のライゼートとか抽出液とかで、いろんな蛋白質の混合物だと、プロテアーゼとかフォスファターゼとかも含まれてたりするので、そういうのが保存中にゆっくり働いてしまうと保存中に試料が変質して正しい結果が得られないので、すくなくとも蛋白質が変性するような抽出条件でないなら、何か特別な理由がない限り普通は−８０Cに保存するとおもう。RIPA bufferはそんなに強力なbufferじゃないし、プロテアーゼインヒビターも別に100%抑えるという訳じゃない（ある程度はそれなりに抑えるというのが現実）のでやっぱ限度あるし、入れてても分解起きるときは普通に起きる。PMSFとかみたく水溶液中では不安定でそんなに長持ちしないのもあるので、入れてるから安心というわけでない。

(無題) 削除/引用 No.2454-2 - 2013/10/15 (火) 21:09:48 - Harmonia 違い以前に、あなたのラボではなぜ４℃に保存しているのですか？ また、隣のラボの事情は、隣のラボの方に伺ってください。 それぞれそうしている根拠があるはずです。

タンパク質保存について 削除/引用 No.2454-1 - 2013/10/15 (火) 20:57:49 - ふうみ いつも勉強させて頂いています。 タンパク質を保存する際、うちのラボでは4℃で保存していますが、隣のラボでは-80℃で保存してるようです。この違いは何なのでしょうか？ちなみにうちのラボのRIPA buffer中にはProtease inhibitorが入っているのですが、何か関係はあるのでしょうか？ 皆様よろしくお願い致します。

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