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(無題) 削除/引用 No.2496-4 - 2013/10/28 (月) 18:50:31 - 独り言 誰かに聞いたのか、何かのインストラクションを読んだのか忘れましたが、パーケジング細胞にウイルスベクターを導入して、セレクションして安定発現株を作成することは、とても危険だと。そもそもウイルス自身の増殖能をなくすために、gag pol envとベクターを別々にすることで、安全に使用することを前提なので、培養細胞内であろうとも、すべてを一緒にゲノムに組み込むと、万が一にも増殖能をもったものが生まれる可能性があり、よくない。少なくともそのような安定発現株の作成は日本のP2レベルでは扱えない、と聞いた覚えがあります。たぶん。 ちなみにトランスフェクション後４８時間後に、一回ウイルス液を回収して、もう一回培地を入れて、さらに一日2日後にウイルスをもう一回回収することはできます。タイターが少し下がるかもしれませんが、もともとタイターの高いウイルスなら問題ないと思います。さらに長くやっても、一過性発現だと発現が落ちるので、意味がないでしょう。その細胞を保存することは、上記の理由も含めてお勧めできません。

(無題) 削除/引用 No.2496-3 - 2013/10/28 (月) 12:19:57 - ~ 他の293ベースのでは薬剤セレクションをかけてstableにウイルスを作る細胞を得る方法があるようですね。 http://www.qb.fcen.uba.ar/bm/2009%20(ir%20a%20materias.qb.fcen.uba.ar)/TE%D3RICO-PR%C1CTICO/Clase%207/bibliograf%EDa%20vectores%20virales/retrovirus%20MMLV/RetroX%20(Clontech).pdf

(無題) 削除/引用 No.2496-2 - 2013/10/28 (月) 11:24:59 - TK-1 基本的にはtransient transfectionですから。もう一回トランスフェクションするってことですか？

トランスフェクション後のPLAT-Eについて 削除/引用 No.2496-1 - 2013/10/28 (月) 11:22:44 - みさみさ いつもお世話になっています。 ご質問よろしくお願い致します。 PLAT-Eにレトロウイルスベクターをトランスフェクションしてウイルスをつくらせます。2日後にウイルスを回収したあと、ふつうみなさんPLAT-Eは捨ててしまうと思うのですが、このPLAT-Eを継代してさらにウイルスをつくらせる、または-80℃保存しておいて後日起こしてまたウイルスをつくらせるということは可能なのでしょうか？ よろしくお願い致します。

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