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御礼 削除/引用 No.2572-8 - 2013/11/20 (水) 09:37:44 - 細胞からのＲＮＡ抽出 おお様、皆様 素人の私にご丁寧にありがとうございました。 おおさま ご指摘のとおりですが、ふと、キットで取れているのか　キットでなくても取れるのでは？と思ったのがきっかけでして、特にこの点　こだわりがあったというわけではないのです。ご指摘のとおり、細胞がバーストしているのかもしれません。 皆様 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.2572-7 - 2013/11/19 (火) 23:46:45 - おお わたしも細胞から低ちょうな溶液のため膨らんできてこわれたのかとおもいました。もちろんそう言う方法でもRNAはとれるわけで、RNAの安定性、抽出効率の考慮を加えると精製できるわけですが、方法をそのために自分で樹立するという手間はかかります。それでもそう言う方法で見たい理由があれば、やるでしょうけど。 あとは指摘があると思いますが、さいぼうが壊れただけなのでタンパク質やその他の成分がかなりまじってます。 細胞が壊れないようにというなら確かにPBSとか等ちょうになっているものを使えばかなり改善されるとおもいますが、なぜその様なコントロールが必要なのかあまりぴんと来ません。

なるほど 削除/引用 No.2572-6 - 2013/11/19 (火) 19:20:05 - 細胞からのＲＮＡ抽出 ＴＥ様 たしかに精製をしていないので、ＴＥのみでは汚いかもしれないですね。アジレントの電気泳動ではＲＮＡのみしか見ないので、それがどこまで精製されているかはわかりませんし・・・・ ちなみに、細胞をバーストさせない液としてはＰＢＳなのでしょうか？ それとも細胞種によって、バーストさせる液は変わりますでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2572-5 - 2013/11/19 (火) 19:14:28 - TE TEのコンタミはないとして、TEは低張液なので細胞がバーストしてるんじゃないですかね。 キットを使うのは、細胞を完全に溶解することでほぼ全てのmiRNAを回収するのが目的であって、実験によって回収されるmiRNAにムラがあっては困るからですよね。 さらに、その後の実験で使うためにはmiRNAのみを精製する必要がありますよね。 TEのみで回収された溶液にはmiRNA以外のものも含まれていて、細胞から出てきたと思われるmiRNAの種類や量もサンプルによって差がありそうです。 もし、キットを使った場合でもTEのみで抽出した場合でもその後の実験結果が全く同じであるなら、キットは必要ないと言えますよ。

ご返答 削除/引用 No.2572-4 - 2013/11/19 (火) 18:46:35 - 細胞からのＲＮＡ抽出 皆様 ご返答ありがとうございます。ハイピュアmiRNAアイソレーションキット というものを使っています。 細胞からmiRNAを抽出しているのですが、ふと、このキットを使わずに 細胞を遠心洗浄して、そこにＴＥ bufferを加えたサンプルでもmiRNAが出ていないか確認しないとと思いました。 サイズの確認はアジレントのバイオアナライザーを使用しています。 量的には抽出キットを用いた方が5倍多いのですが、どうしても細胞を洗浄して、ＴＥを加えた直後にmiRNAが検出されるのが腑に落ちません。 また、それなら、キットはいらないということにならないでしょうか？ また、キットは細胞内のmiRNAを取ってきていると言えるのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.2572-3 - 2013/11/19 (火) 18:17:48 - ああああ 市販のキットは何を使用されているのでしょうか？ >この際、何度測定しても（細胞を洗浄し、バッファーに細胞を入れているインキュベーション時間は数分）　この細胞にバッファーを加えただけの場合でもRNAが観察されます。 二つの区でほぼ等量のRNAが回収されてしまっているということでしょうか？差はありますか？

(無題) 削除/引用 No.2572-2 - 2013/11/19 (火) 17:46:10 - AP よくわからない。 >RNAが観察されます。 どのような方法で、何を見ているのか？ コントロールと実験区で同じものが観察されるということか？ >この際、コントロールとして、細胞にバッファーのみ（溶解液中の界面活性剤等除去したもの）を加えたものを用意しています。 これは何を比較するためのコントロールか？　（おそらく洗液に含まれる分泌性のmiRNAに関係ありそうだが）

細胞からのＲＮＡ抽出 削除/引用 No.2572-1 - 2013/11/19 (火) 17:03:55 - 細胞からのＲＮＡ抽出 今　細胞からmiRNA抽出を行っております（市販のキットで） この際、コントロールとして、細胞にバッファーのみ（溶解液中の界面活性剤等除去したもの）を加えたものを用意しています。 この際、何度測定しても（細胞を洗浄し、バッファーに細胞を入れているインキュベーション時間は数分）　この細胞にバッファーを加えただけの場合でもRNAが観察されます。 この原因は何でしょうか？　 何か心当たりのある方おられたら、ご教授いただければ幸いです

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