Bio Technical フォーラム

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人工合成遺伝子作製 トピック削除
No.2610-TOPIC - 2013/12/01 (日) 12:05:20 - ship
突然誠に申し訳ありません。培養細胞の実験は慣れてなく基本的な質問で誠に申し訳ありませんが、ご教授の程よろしくお願いいたします。

人工合成遺伝子(プラスミドDNA)を作成し、HEK細胞に発現させ、パッチクランプを施行することを考えております。

この場合、人工合成遺伝子は発現させたいタンパクのmRNAの配列(イントロンなども含んだ)を作成すればよいのでしょうか?それともcomplete cdsの配列で作成すればよいのでしょうか?

哺乳動物の遺伝子を大腸菌などはしっかりスプライジングされるものなのでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.2610-3 - 2013/12/01 (日) 13:47:15 - おお
> 哺乳動物の遺伝子を大腸菌などはしっかりスプライジングされるものなのでしょうか?

No, I don't think so. But you are not going to express the protein in E coli. Does it matter? Or are you going to produce recombinant proteins in E coli, and transfect the proteins into cells? In this case, it matters.

I do not know what experiment you are going to do, so I can not suggest anything properly. Why don't you check similar experiments published and how those experiments have done.

My guess is you just need the protein cording sequence, but you can include intron sequences when you transfect the plasmid into HEK. This is just guess, not the answer.

(無題) 削除/引用
No.2610-2 - 2013/12/01 (日) 12:41:10 - qq
>mRNAの配列(イントロンなども含んだ)を作成すれば
>哺乳動物の遺伝子を大腸菌などはしっかりスプライジングされるものなのでしょうか?

あなたが日本語に不自由なのであれば、英語で質問する方が良いかもしれません。
もしも、母国語で行った質問を日本語に自動翻訳したのだとすると、そうするべきではありません。あなたの母国語が日本語なのであれば、質問を見直して校正すべきです。
見直してみると、”スプライジングされる”の「される」は、受身ではなくて、丁寧語なのでしょうかね?そうだとすると、まあ、良いのかもしれません。普通、「大腸菌」樣に丁寧語は使いませんね。

質問の部分に関しては、「それともcomplete cdsの配列で作成」するのが遺伝子発現実験で普通かつ簡単な方法です。

人工合成遺伝子作製 削除/引用
No.2610-1 - 2013/12/01 (日) 12:05:20 - ship
突然誠に申し訳ありません。培養細胞の実験は慣れてなく基本的な質問で誠に申し訳ありませんが、ご教授の程よろしくお願いいたします。

人工合成遺伝子(プラスミドDNA)を作成し、HEK細胞に発現させ、パッチクランプを施行することを考えております。

この場合、人工合成遺伝子は発現させたいタンパクのmRNAの配列(イントロンなども含んだ)を作成すればよいのでしょうか?それともcomplete cdsの配列で作成すればよいのでしょうか?

哺乳動物の遺伝子を大腸菌などはしっかりスプライジングされるものなのでしょうか?

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