全6件 ( 1 〜 6 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.264-6 - 2012/03/09 (金) 13:58:36 - 月詠 構造的なことを考慮すると、一般的には、deletion変異体のデータよりは、Ala置換変異体のデータの方が信頼性が高いと思うのですけど、LC-MS/MS解析のデータと矛盾するので悩ましいところですね…。＾＾； みもふたもない解決法ですけど、、一番手っ取り早いのはAla置換変異体もLC-MS/MS解析して、どの部位に糖鎖が付加されているか調べてみることではないでしょうか？ 変異体のAla-Ala-Val-Ala-Ala部位への付加が示唆されなければ、（Ser-Ser-Val-Ser-Serへの付加を示唆する）正常型（野生型）で得られている解析結果を支持することにもなりますので、試してみて損はないと思います。 あるいは、Ｏ結合型のグリコシル化はリン酸化で競合阻害できると思いますので、リン酸化で競合阻害されない場合は、セリン/スレオニン残基へのＯ結合ではなく、どこか別のアスパラギン残基へのＮ結合で結合してしまっているのかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.264-5 - 2012/03/08 (木) 13:16:36 - お粗末君 >GlcNACシグナルが90％程度減少している 4つが主な修飾部位という解釈ですよね。4つの他に候補があればそれこそalaninに置換しても問題ないのでは？それを元に4つの部位を置換してみてはいかがでしょう。

(無題) 削除/引用 No.264-4 - 2012/03/08 (木) 10:05:37 - GlcNAC修飾サイトについて スレ主です。deletionだと構造が変わるということは確かにもっともらしいですね。実は４カ所のSerのうち１つずつAlaに変異させたmutantも作成しassayしたのですが、やはりWTと比較して変化はないのです。

(無題) 削除/引用 No.264-3 - 2012/03/07 (水) 18:30:24 - TS ４つすべてアラニンに変異させたら、構造が変わったりして、なぜか変なところが修飾されるようになってしまった。。。。かもしれません。（結果そのままの解釈ですが） ４つともアラニンに置換した変異体で、MS/MS解析はしてみればはっきりしませんか。 あるいは１つづつ変異させてみてはどうでしょう？

(無題) 削除/引用 No.264-2 - 2012/03/07 (水) 17:58:30 - お粗末君 ＞ここのSer以外の場所でGlcNAC修飾がかかる、 4つも同時にdeletionすれば大きく構造が変わりそうなので、alaninに置換の方がＷＴに近い気がしますが。その点はどうお考えでしょうか。

GlcNAC修飾 削除/引用 No.264-1 - 2012/03/07 (水) 17:32:28 - GlcNAC修飾サイトについて ある蛋白のO-GlcNAC修飾部位を同定すべく、LC-MS/MS解析を行ったところ、その蛋白内のSer-Ser-Val-Ser-Serという配列中のいずれかのSerが怪しいということになりました。そこで、この5つのアミノ酸を全てdeletionさせたmutantを作成し、細胞に過剰発現させ、回収→IP→GlcNAC抗体でWBでdetectすると、みごとにGlcNACシグナルが90％程度減少していることが確認できました。ところが、次に、この4つのSerを全てAlaに置換したmutantを作成し、同様にGlcNAC修飾を検討すると、WTと差がまったく認められず、ここのSer以外の場所でGlcNAC修飾がかかる、という結果となりました。どなたかこの謎を解決する方法を教えてください。

全6件 ( 1 〜 6 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---