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(無題) 削除/引用 No.2745-5 - 2014/01/24 (金) 07:48:40 - protein PMA/ionomycinの代わりにCD3/28で再刺激するというプロトコルもあります。 阻害剤を入れるだけでも見えるものは見えるのですが、 やはり再刺激をすると応答が強いのでそのようなプロトコルが流通しているのではないかと。

(無題) 削除/引用 No.2745-4 - 2014/01/20 (月) 17:59:14 - おお >[Re:1] マウス　vitro実験さんは書きました : > マウス脾臓なnaiveT細胞をvitroにてTh1分化をしています。 > 論文を確認すると、CD3/28刺激下にて3日から4日間分化をし、その後PMA/ionomaycin/golgiにて再度4−5時間刺激をしています。 "CD3/28刺激下にて3日から4日間分化をし" 正確に読み取ってそう言うことなら、分化はCD3/28刺激だけでOKということになりますね。ゴルジや分泌系をいじるような薬剤を使っているので、その辺の経路を見るための工夫じゃないかと思えますね。

(無題) 削除/引用 No.2745-3 - 2014/01/20 (月) 16:08:34 - み 情報量が少ないので想像だけど、 そのプロトコールではPMA,ionomycinはサイトカイン分泌を惹起させるために加えているような気がする。 Th1へ分化させたあと、再刺激し、golgi stopを加えておいてFACSでサイトカインのコンテントを見てるのでは？ Th1への分化目的のみなら最初のCD3,CD28刺激のみでも良いかも。 僕は免疫の専門化じゃないので参考まで。

(無題) 削除/引用 No.2745-2 - 2014/01/20 (月) 16:04:41 - HIH 実際最後の数時間にゴルジ阻害剤を加えれば十分IFN-γは染まる。 IFN-γなら加えなくても少しは染まる。 PMA/Iono刺激を行うともっとよく染まる。 目的次第。

PMA/ionomycin 、CD3/28　刺激の違い 削除/引用 No.2745-1 - 2014/01/20 (月) 11:41:28 - マウス　vitro実験 マウス脾臓なnaiveT細胞をvitroにてTh1分化をしています。 論文を確認すると、CD3/28刺激下にて3日から4日間分化をし、その後PMA/ionomaycin/golgiにて再度4−5時間刺激をしています。 私もそのプロトコール通り行っています。 質問なのですが CD3/28刺激のみで最後の数時間golgiを加えるだけでも良いような気がするのですがわざわざPMA/ionomaycinで再刺激をする必要はあるのでしょうか？ よろしくお願いいたします。

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