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(無題) 削除/引用 No.2746-4 - 2014/01/21 (火) 15:29:25 - alpha wellに播く培地量を変えれば？ BMDMなら100ulもあれば十分でしょう？

(無題) 削除/引用 No.2746-3 - 2014/01/20 (月) 14:32:46 - 東京 ご教授ありがとうございます。 CBAで測定しております。 ２×はやはり多いですよね。 もし濃いサンプルが上記よりも多めに欲しいのであれば以下もできます。 例えば24 wellプレートに5x105ぐらいのBMDMを播いて、mediumを500マイクロとかで刺激すると、（もし現在96wellで200マイクロで刺激していたとすると）実質的に2倍。 たぶん24hの刺激程度だとまだもう少しmedium減らせると思うので、もう少し濃くできるかも。 細胞がいっぱいあるなら6well（2.5x106ぐらいがmax？）の1mLでやったりとかすると5倍。 上記アドバイスの通り6wellでやってみようと思います。 刺激は２４ｈです。 実質５倍となったらかなり実験には助かります。 アドバイスありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.2746-2 - 2014/01/20 (月) 13:42:04 - 7744 2x105/wellは結構細胞パンパンになる気が・・・ 他の人はどうかはわかりませんが、個人的にはやらないです。 ELISAでの測定でしょうか？ もしELISAであれば、測定時のサンプルの希釈倍率を下げることで解決できるはずです。 あるいは刺激する時のmediumの量を減らしてあげれば濃度は上がるでしょう。もちろん得られるサンプルの量も減りますが・・・ もし濃いサンプルが上記よりも多めに欲しいのであれば以下もできます。 例えば24 wellプレートに5x105ぐらいのBMDMを播いて、mediumを500マイクロとかで刺激すると、（もし現在96wellで200マイクロで刺激していたとすると）実質的に2倍。 たぶん24hの刺激程度だとまだもう少しmedium減らせると思うので、もう少し濃くできるかも。 細胞がいっぱいあるなら6well（2.5x106ぐらいがmax？）の1mLでやったりとかすると5倍。

96well マウス骨髄由来マクロファージ刺激の細胞数 削除/引用 No.2746-1 - 2014/01/20 (月) 11:48:14 - 東京 いつもホームページを見て勉強させて頂いています。 ご教授お願いしたいのですが 96wellプレートにマウス骨髄由来マクロファージを1×10^5個ずつまいてLPS＋抗体にて刺激をしてIl-12サイトカイン産生を調べています。 Il-12産生量を現在より高い濃度欲しいのですが ・96well にまく細胞数を２×１０^５個ずつまく この方法はいかがでしょうか？ （LPSの濃度、抗体濃度はすでにふって確認しておりあまり変化はありませんでした。）

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