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Oct4のプロモーターと赤色蛍光タンパク質 トピック削除
No.2871-TOPIC - 2014/03/06 (木) 10:29:21 - ブラディ
赤色蛍光タンパク質について質問がございます。
マウスOct4のプロモーターの下流に、赤色蛍光タンパク質を融合させたレポーターを作りたいと思ってます。
しかし、どのような赤色蛍光タンパク質をつけるべきか悩んでます。
赤色蛍光タンパク質とはいえ、色々な種類があって、dtTOMATO、mcherry、dsREDなど…。
ちなみにうちにはdsREDしかありません。
このようなレポーターを作る場合、どの赤色蛍光タンパク質がふさわしいのでしょうか?
dsREDはmcherryに比べて蛍光強度が弱いみたいですが、dsREDでも大丈夫でしょうか?
 
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No.2871-6 - 2014/03/08 (土) 20:48:22 - Harmonia
Addgeneとか理研の遺伝子バンクとかに無いのかな?
世の中の誰かが作っていそうだけど。

(無題) 削除/引用
No.2871-5 - 2014/03/06 (木) 20:47:47 - ブラディ
AAさん、わかりやすい表を教えていただいてありがとうございました。
とても参考になります。
今、タカラがキャンぺーーん中とのことで、ふさわしいベクターの購入を
考えてみたいです。
そのほかの方々もご意見を頂いてありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.2871-4 - 2014/03/06 (木) 19:16:25 - AA
タカラのサイトにこんなページが有りました。

http://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.asp?unitid=U100006268

既に他の方からもご指摘のあるように、単純なレポーターであれば
制限は少ないと思いますのでご自分の環境に合わせるのが良いかと思います。

(無題) 削除/引用
No.2871-3 - 2014/03/06 (木) 16:19:24 - 通りすがり
dsredはFITCのフィルタに漏れ込み易かったとおもうから、
mcherryとかにする方が良いと思うけどね。今TAKARAでキャンペーンやってるから安いし。
まぁ、何をしたいかによるよ。
二色で観たいとかがないんなら上にかいたのは気にしなくていいし、
プロモーター活性が弱い細胞でも検出したいなら、もっと明るいタンパクがいいだろうし。
レポーターコンストラクトを作って何をしたいかしらないけど、目的をよく考えて、安物買いの銭失いにならないようにね。

(無題) 削除/引用
No.2871-2 - 2014/03/06 (木) 11:57:55 - yyy
とりあえずは手持ちの蛍光顕微鏡and/orコンフォーカルのフィルターとの相性だと思いますが、どうなんでしょう?
蛍光タンパクありきでそれに合わせてフィルターを買えると言うのなら話は別ですが。

あと、どういう実験をするか、他の色素と重染色するかとかにもよるのではないでしょうか? 
単にレポーター目的だったら多量体形成も気にすること無さそうだし、自由度高いと思いますが。

Oct4のプロモーターと赤色蛍光タンパク質 削除/引用
No.2871-1 - 2014/03/06 (木) 10:29:21 - ブラディ
赤色蛍光タンパク質について質問がございます。
マウスOct4のプロモーターの下流に、赤色蛍光タンパク質を融合させたレポーターを作りたいと思ってます。
しかし、どのような赤色蛍光タンパク質をつけるべきか悩んでます。
赤色蛍光タンパク質とはいえ、色々な種類があって、dtTOMATO、mcherry、dsREDなど…。
ちなみにうちにはdsREDしかありません。
このようなレポーターを作る場合、どの赤色蛍光タンパク質がふさわしいのでしょうか?
dsREDはmcherryに比べて蛍光強度が弱いみたいですが、dsREDでも大丈夫でしょうか?

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