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(無題) 削除/引用 No.2883-4 - 2014/03/11 (火) 08:28:29 - DNA mon様 貴重な情報を教えてくださり感謝致します。 なるほど無傷のまま操作するのはかなり難しいのですね。 パルスフィールド電気泳動、調べてみます。 有難うございます！

(無題) 削除/引用 No.2883-3 - 2014/03/11 (火) 06:00:06 - mon 目的が不明ですが、いくつか実際の実験上のトラブルが予想されますので、指摘しておきます。 > ヒトの１細胞をエッペンチューブに移し、溶解します。 SDSを使うと、動物細胞の場合topoII（だったかな？）結合部位で染色体DNAが断片化します。 それを防ぐためにはSarcosylを使う、という方法があります。 染色体DNAを無傷のまま扱うのは、非常に難しいことを忘れないでください。 （「パルスフィールド電気泳動」を行うための試料調製を調べれば良いでしょう） また、シリコナイズした低吸着チューブをお薦めします。 > 例えば1本のチューブに1000粒のビーズをいれると46本の染色体DNAはそれぞれ別のビーズに結合すると考えていいのでしょうか？ 染色体DNAの物理的長さとビーズ濃度によるでしょう。おそらく1本の染色体DNAが複数のビーズに結合して物理的な力で剪断されると思います。これは純粋に確率の問題かな？ > １つのビーズに46本全て結合させたければチューブ内に１つしかビーズを入れてはならないという認識で宜しいでしょうか？ そうだと思います。ビーズの結合容量から推定してください。但し、無傷〜20kbpくらいのDNAだと溶出が困難であることも予想されます。

1細胞染色体DNAを全て1つのビーズに結合させるには 削除/引用 No.2883-1 - 2014/03/11 (火) 03:45:09 - DNA いつもお世話になっております。 現在１細胞のゲノム増幅を行うことを考えております。 実験の都合上少しユニークな方法が必要なのですがご助言頂ければ幸いです。 ヒトの１細胞をエッペンチューブに移し、溶解します。 その後DNA binding beadsに結合させなくてはなりません。 （この点がトリッキーなのですが。） ここで疑問なのが染色体DNAの挙動です。 例えば1本のチューブに1000粒のビーズをいれると46本の染色体DNAはそれぞれ別のビーズに結合すると考えていいのでしょうか？ １つのビーズに46本全て結合させたければチューブ内に１つしかビーズを入れてはならないという認識で宜しいでしょうか？ （1つのビーズに46本も結合できるかどうか疑問ですが。） 宜しくお願いいたします。

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