全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.3063-3 - 2014/05/23 (金) 17:25:12 - L 細胞表面マーカーを一緒に染めたい場合は、固定前（permeabilization前）に染色してください。固定後だと、細胞内蛋白も染まるので、細胞表面にマーカーを発現していないけれど細胞内にはその蛋白が存在するような場合に、false positiveになります。また、細胞表面マーカーの抗体には、固定後の抗原との反応性が確認されていないものもありますので。 細胞内蛋白については、permeabilization後でないと染色できないので、固定後という事になります。BrdU抗体の前、後、あるいは同時に染色するかは、その抗体によります。例えば、細胞内蛋白染色が２次抗体を必要とし、１次抗体とBrdU抗体の動物種が同じ場合は、細胞内染色の２次抗体まで先にやっておいてからBrdU抗体（fluorochrome-conjugatedですよね？）で染色する必要があります。

(無題) 削除/引用 No.3063-2 - 2014/05/23 (金) 16:23:44 - いむ 抗体によるとしか言えないので、そんな手間でもないでしょうし自分でやってみて比較するのがベストです。

BrdU Flowの染色について 削除/引用 No.3063-1 - 2014/05/23 (金) 16:09:37 - kenkyuusitu こんにちは 大学で研究室に所属する学生です。 今回BrdU Flowを初めてやるのですが、その実験手順で疑問があったので質問させて頂きました。 ある会社のBrdU Flowキットを使って実験を行う計画をたてています。 プロトコールを読んだところ、はじめにBrdUの取り込みを行い、その後オプションの過程として細胞表面のみたい抗原を染色できるとのことでした。（ホルムアルデヒド固定？の場合はもっと後の段階で染色する） 最後に固定と染色（anti-BrdU）をおこなうとあったのですが、この段階でも自分のみたい細胞表面もしくは細胞内抗原に対する抗体を加えることができるとのことでした。ただし、この段階で加える場合は固定エピトープ（fixed epitope）を認識できるものでなければならないと記載がありました。 私は研究自体初心者で、フローもあまり経験がありません。 上記の実験手順で、BrdUの染色の他に、自分でみたい抗原を染める場合、「細胞を固定・Anti-BrdUを加える」という手順の前と後の、どちらのタイミングで抗体を加えるのがベストなのでしょうか？ 自分の使いたい抗体がホルムアルデヒドの影響を受けてしまう場合は後、その他は前、と考えてよいのでしょうか？ 自分でもいろいろと調べてはいるのですが、思うように調べられません。 なにか参考となる文献をご紹介頂けるだけでもけっこうですので、アドバイス頂ければと思います。 分かりにくい文章で申し訳ありません。よろしくお願いします。

全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---