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細胞内過酸化水素の測定方法 トピック削除
No.3164-TOPIC - 2014/06/27 (金) 18:58:21 - ロス
お世話になっております。

現在ある細胞2種(変異型と親株)の細胞内過酸化水素の量を測定しております。
(酸化ストレスに関する実験です)
フローサイトメトリーで測定しているのですが、測定値の変動が大きく、ばらつきをどう解釈したらよいのか悩んでいます。
ちなみに、測定前には、3回細胞数を合わせ(24時間ごとに)、細胞の状態を揃えております。
単に差がないと解釈するのは抵抗があります。(実験法に問題があるのでは?と考えてしまう)
そこで、ROSを測定する際の注意点などありましたら教えて頂きたいです。
また、フローで測定するよりもばらつきが小さい方法や、確実な方法などありましたら、ご教授頂きたいです。
よろしくお願いします。
 
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trypsin 削除/引用
No.3164-5 - 2014/06/28 (土) 10:16:00 - 中西部ポスドク
もし接着細胞であればトリプシン処理でもROSが増えますので、PBS-EDTAとかではがしてはどうでしょう?
http://www.researchgate.net/post/DCF_DA_fluorescense-ROS_detection_in_attached_cells

(無題) 削除/引用
No.3164-4 - 2014/06/28 (土) 06:02:24 - おお
クリアーに2群に分かれてなくても、distributionに違いがあるかもしれませんので、histogramなどをみてみればいいかと思います。単にdistributionがひずんでいたり、none respondersが低い方に平均を引っ張っていたりしているのであれば、ノンパラその他の統計手法も使えます(結論の出し方の意義を考慮した上で)。各細胞周期のphaseでROSの出方も違うかもしれませんし、全体のポピュレーションでなく、細胞周期やほかのパラメーターを探ってみてもいいかもしれません(もしdistributionにさがあるなら).

(無題) 削除/引用
No.3164-3 - 2014/06/28 (土) 02:09:22 - おお
たとえば、ROSが低い群と高い群があって、平均するとばらつきがあるように思えるということはないでしょうか。フローサイトであればそう言う解析もできますので、一度データーの詳細をみてみてはどうでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.3164-2 - 2014/06/27 (金) 19:50:07 - qw
ポジコン取ってる??

細胞内過酸化水素の測定方法 削除/引用
No.3164-1 - 2014/06/27 (金) 18:58:21 - ロス
お世話になっております。

現在ある細胞2種(変異型と親株)の細胞内過酸化水素の量を測定しております。
(酸化ストレスに関する実験です)
フローサイトメトリーで測定しているのですが、測定値の変動が大きく、ばらつきをどう解釈したらよいのか悩んでいます。
ちなみに、測定前には、3回細胞数を合わせ(24時間ごとに)、細胞の状態を揃えております。
単に差がないと解釈するのは抵抗があります。(実験法に問題があるのでは?と考えてしまう)
そこで、ROSを測定する際の注意点などありましたら教えて頂きたいです。
また、フローで測定するよりもばらつきが小さい方法や、確実な方法などありましたら、ご教授頂きたいです。
よろしくお願いします。

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