Bio Technical フォーラム

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ISOGEN(AGPC法)からのゲノム抽出について トピック削除
No.3207-TOPIC - 2014/07/09 (水) 19:16:08 - tam
いつも勉強させてもらっています。一つ相談させてください。

現在ISOGENを使って組織を破砕、
クロロホルムを加えて遠心、上清(RNA)を保存した後、
水相にエタノールを入れてDNAを回収しております。

このDNAの回収ステップが非常に煩雑であり、
10%エタノール/クエン酸バッファーで30分 washを2回、
70%エタノールwashを2回 しているのですが、
サンプル数が多いとなかなか大変で、
なんとか簡略化できないものかと思っています。

ODが高い必要は全くなくて、PCRがかかれば良いのです。
どなたかよいプロトコルをお持ちでしたら、ご教授いただけませんでしょうか?
よろしくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.3207-3 - 2015/07/28 (火) 22:17:55 - おお
中間層、有機層にエタノールを加える前になんとか溶液状になるようにしてクロロフォルムなどをかましてからエタチンすれば何とかなると思いますけど、、、具体的にプロとコール考えてみてもいいですが、机上の空論になってしまうかもしれないので、、、

あるいはISOGENでhomogenizeした直後1/10をDNAに回すぐらいで十分ならそちらからというてもありますが、これもやはり方法論的にはこれでうまくいくだろうと思うようなものは組めそうですが、、、

(無題) 削除/引用
No.3207-2 - 2015/07/28 (火) 15:51:37 - z

ISOGEN(AGPC法)からのゲノム抽出について 削除/引用
No.3207-1 - 2014/07/09 (水) 19:16:08 - tam
いつも勉強させてもらっています。一つ相談させてください。

現在ISOGENを使って組織を破砕、
クロロホルムを加えて遠心、上清(RNA)を保存した後、
水相にエタノールを入れてDNAを回収しております。

このDNAの回収ステップが非常に煩雑であり、
10%エタノール/クエン酸バッファーで30分 washを2回、
70%エタノールwashを2回 しているのですが、
サンプル数が多いとなかなか大変で、
なんとか簡略化できないものかと思っています。

ODが高い必要は全くなくて、PCRがかかれば良いのです。
どなたかよいプロトコルをお持ちでしたら、ご教授いただけませんでしょうか?
よろしくお願い致します。

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