Bio Technical フォーラム

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シークエンス トピック削除
No.3301-TOPIC - 2014/08/17 (日) 16:59:50 - 大学院生
シークエンスの簡単な原理はわかっているつもりですが
疑問があります。

電気泳動したbandの配列をシークエンスで調べる場合,プライマーはどうするのでしょうか?

非特異的なプライマーを使えばいいのでしょうか?

そうするとプライマーのつく位置はばらばらなのでシークエンス機械内での泳動の差はわからないような気がするのですが…

宜しくお願いします
 
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(無題) 削除/引用
No.3301-5 - 2014/08/18 (月) 09:38:32 - ~
>なにものかわからない産物を
>シークエンしたい場合はどうしたらいいのでしょうか?

全く何物か分からないのでしたら、DNAの末端を整えてベクターとライゲーションしてクローニングし、そのベクター上のインサートのDNA配列を読んではいかがでしょうか。
ベクターに繋げずにアダプターとライゲーションし、そのアダプターの配列をプライマーにして読んでもいいのかもしれません。

そのバンドを構成するDNAが複数である可能性と、複数であった場合に取りこぼしが許容できるかどうか、
後でそのバンドのDNAを回収する可能性があるかや、どの位の数をこなす必要があるか、
等で、どのような方法で読むのがいいのかは変わってくるでしょう。

(無題) 削除/引用
No.3301-4 - 2014/08/18 (月) 09:36:42 - 緑のパネル14
適当なベクターにクローニングして、ベクタープライマーで読む。

ありがとうございます。 削除/引用
No.3301-3 - 2014/08/18 (月) 09:10:31 - 大学院生
なにものかわからない産物を
シークエンしたい場合はどうしたらいいのでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.3301-2 - 2014/08/17 (日) 22:38:57 - sanger
特異的なプライマーを使えばいいです。

そうするとプライマーのつく位置は一定なのでシークエンス機械内での泳動の差はわかるようになります。

シークエンス 削除/引用
No.3301-1 - 2014/08/17 (日) 16:59:50 - 大学院生
シークエンスの簡単な原理はわかっているつもりですが
疑問があります。

電気泳動したbandの配列をシークエンスで調べる場合,プライマーはどうするのでしょうか?

非特異的なプライマーを使えばいいのでしょうか?

そうするとプライマーのつく位置はばらばらなのでシークエンス機械内での泳動の差はわからないような気がするのですが…

宜しくお願いします

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