Bio Technical フォーラム

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超迅速な beta-gal 染色 トピック削除
No.3309-TOPIC - 2014/08/21 (木) 16:40:07 - 氷水
変異染色体にマーカーとして lacZ を持つ動物を扱っているため、beta-gal染色を genotyping に用いています。
通常染色は1時間以上かかると思いますが、これを3-5分程度で行う方法、アイデアをお持ちの方がいらっしゃれば教えて頂けないでしょうか。
genotyping とサンプリングを同時に行う必要があり、1時間以上待っていると RNA が分解してしまうため実験になりません。また、超微小組織を扱っているため、凍結保存が難しいためこのようにその場で genotyping とサンプリングを同時に行う必要があります。
 
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(無題) 削除/引用
No.3309-5 - 2014/08/21 (木) 23:43:13 - おお
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19689207
cancerres.aacrjournals.org/content/64/5/1579.full.pdf

いきたままでもみれそうね。

(無題) 削除/引用
No.3309-4 - 2014/08/21 (木) 21:18:40 - mon
蛍光基質
http://www.funakoshi.co.jp/contents/3831
発光基質
http://roche-biochem.jp/catalog/index.php/product_3.5.3.18.6.2/category_33061.html

(無題) 削除/引用
No.3309-3 - 2014/08/21 (木) 18:20:26 - AP
標的組織のみgenotypeが異なるような(組織特異的組換え系とか)なんでしょうか。普通だったら、生かしたまま採取できる組織試料(マウスだったらテイルとか、ショウジョウバエだったら翅や脚とか)からあらかじめPCRかけてgenotypeingするとかできますよね。「超微小組織を扱っているため、凍結保存が難しいため」という理屈もピンと来ません。

そうではなくて、採取した組織そのもののgenotypingが必要なら、先のかたが書かれているように、すべての試料でRNA精製を進めるのがいいのではないでしょうか。精製初期の段階(例えばグアニジンでlysisした段階)で分取してEtOH pptなどしてからPCRでゲノム上のlacZを検出すれば、その段階でネガティブのものは弾くことができますね。

(無題) 削除/引用
No.3309-2 - 2014/08/21 (木) 17:24:01 - ふり
1回あたりのサンプル数がどのくらいかによりますけど、とりあえずRNAが目的なら回収した組織全部からRNAを精製してしまって、RT-PCRでlacZを確認すればよいのでは?

超迅速な beta-gal 染色 削除/引用
No.3309-1 - 2014/08/21 (木) 16:40:07 - 氷水
変異染色体にマーカーとして lacZ を持つ動物を扱っているため、beta-gal染色を genotyping に用いています。
通常染色は1時間以上かかると思いますが、これを3-5分程度で行う方法、アイデアをお持ちの方がいらっしゃれば教えて頂けないでしょうか。
genotyping とサンプリングを同時に行う必要があり、1時間以上待っていると RNA が分解してしまうため実験になりません。また、超微小組織を扱っているため、凍結保存が難しいためこのようにその場で genotyping とサンプリングを同時に行う必要があります。

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