Bio Technical フォーラム

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定量PCRの解析手法について トピック削除
No.3357-TOPIC - 2014/09/08 (月) 16:04:29 - iiio
よろしくお願いします。

健常個体と疾患個体のPBMCを採取し、ある遺伝子(Aとします)の発現を比較したいと考えています。

遺伝子A、内部標準ともに検量線を引いてコピー数を算出し、[Aのコピー数/内部標準のコピー数]を計算して健常個体と疾患個体で比較するという方法で行うつもりなのですが、

この場合、キャリブレーターを入れる必要はあるのでしょうか?

同じ実験を3回繰り返して行うつもりですが、runごとの誤差はrunごとに検量線を作成することで吸収される気がするのですが。
 
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(無題) 削除/引用
No.3357-3 - 2014/09/08 (月) 17:01:02 - iiio
おお様

ご返答ありがとうございます。

triplicateを3回繰り替えすという意味です。そのrunごとに生じる誤差をどうするかという意味です。

(無題) 削除/引用
No.3357-2 - 2014/09/08 (月) 16:49:29 - おお
runごとと言うのがどの様なことをおっしゃっているのかわかりませんが、3回のそれぞれの実験でRNAをとって逆転写した段階で、保存して、一回でPCRすると毎回検量線をひかずにすみますけど。

定量PCRの解析手法について 削除/引用
No.3357-1 - 2014/09/08 (月) 16:04:29 - iiio
よろしくお願いします。

健常個体と疾患個体のPBMCを採取し、ある遺伝子(Aとします)の発現を比較したいと考えています。

遺伝子A、内部標準ともに検量線を引いてコピー数を算出し、[Aのコピー数/内部標準のコピー数]を計算して健常個体と疾患個体で比較するという方法で行うつもりなのですが、

この場合、キャリブレーターを入れる必要はあるのでしょうか?

同じ実験を3回繰り返して行うつもりですが、runごとの誤差はrunごとに検量線を作成することで吸収される気がするのですが。

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