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(無題) 削除/引用 No.3382-11 - 2014/09/18 (木) 23:43:40 - com.com 皆様、ありがとうございます。 確かにultracentri後でも感染細胞への影響は絶対ないとは言い切れないんですね。 勉強になりました。ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.3382-10 - 2014/09/18 (木) 11:00:11 - MP 一度Forskolinでどの程度ウイルスタイターが上がるのかためしたことがあるのですが、無処理にくらべ５％程度の上昇だけでした（理研のパッケージングシステム使用）。感染細胞に悪さをする可能性もあるので普段は使っていません。

(無題) 削除/引用 No.3382-9 - 2014/09/18 (木) 10:01:48 - mon ウィルスの遠心濃縮を行うなら問題ないと思いますが、そうでないとウィルス液にForskolinが残留するので、標的細胞に悪さしそうです。

(無題) 削除/引用 No.3382-8 - 2014/09/18 (木) 09:59:25 - mon 理研で公開しているprotocolによると、Forskolinはfinal 10 uM で使用しています。 http://ja.brc.riken.jp/lab/cfm/Subteam_for_Manipulation_of_Cell_Fate_J/Lentiviral_Vectors_J.html なお、ForskolinはA kinase activatorなのでCMV promoter-specificではありません。おそらく汎用されるRSVやSV40等も含めてウィルス由来のenhancer/promoter全般を活性化するのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.3382-7 - 2014/09/18 (木) 09:15:49 - おお その前にウイルスを作ろうとしているのか、つくったウイルスベクターで発現させようとしているのかどっちかとまよったのですが、、、ウイルスをつくるほうみたいですね。。。パッケージングのシステムはなんでしょうか?

(無題) 削除/引用 No.3382-6 - 2014/09/18 (木) 08:47:52 - len >[Re:5] Lさんは書きました : > 少し勘違いしていたようなので、補足です。「CMVプロモーター」の意味が、5'LTRのU3をCMVプロモーターで置き換えたベクターという事であれば、boostの意味はありますね。 なぜでしょう？ ウイルス産生には関係ないように思いますが。 パッケージングベクターが全てCMVプロモーターということならわかるのですが。

(無題) 削除/引用 No.3382-5 - 2014/09/18 (木) 08:04:46 - L 少し勘違いしていたようなので、補足です。「CMVプロモーター」の意味が、5'LTRのU3をCMVプロモーターで置き換えたベクターという事であれば、boostの意味はありますね。

(無題) 削除/引用 No.3382-4 - 2014/09/18 (木) 07:29:29 - L 私も同じ疑問を感じました。CMVプロモーターはvectorに組み込まれた遺伝子の発現に必要ですが、packagingのレベルではboostしても意味が無い（ウイルスのタイターは上がらない）ような気もするのですが。ウイルスを作って標的細胞に感染した後、その標的細胞でのプロウイルスからの遺伝子発現を上げたいのであれば、boostする意味があるとは思いますけど。

(無題) 削除/引用 No.3382-3 - 2014/09/18 (木) 05:01:47 - あ どうしてforskolinでboostする必要があるのですか？

(無題) 削除/引用 No.3382-2 - 2014/09/18 (木) 01:46:32 - おお ttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12818573 ttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC109363/ You could search articles describing what you want to know.

CMV promotor boosterのforskolin濃度について 削除/引用 No.3382-1 - 2014/09/18 (木) 00:14:18 - com.com いつも勉強させて頂いています。 現在、CMVプロモーターのlenti vectorでover expressionの系を立ち上げ中なのですが、 HEK293Tへのtransfection終了後のmedia changeの時にforskolin（CMV booster）の使用を検討しています。 具体的にはsimpleにDMEM mediaに添加すればいいと聞いたのですが、具体的な濃度が調べてもよくわかりません。 どのくらいの濃度でmediaに添加すればよいのか教えて頂ければ幸いです。 具体的にはmedia change後、1，2両日にvirus液を取ろうと考えています。 宜しくお願いいたします。

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