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(無題) 削除/引用 No.3384-7 - 2014/09/19 (金) 21:47:33 - おお しょう胞体、ミトコンドリアなどであれば、膜がいんたくとであるかがわかるといいのかと思います。 ちょっと具体的な方法論はここでかけるほど思い出しませんが、、、 バッファーについては、精製の時はある程度生理的なコンディションを考慮していろいろ加えるかもしれませんが、最後に浸透圧を考慮した都合のいいバッファーであらればいいかもしれませんね。 microsome fractionは文献を探してしっかりと調査して欲しいのですが、いくらかのミトコンドリアがまじっているでしょうし、エンドそーむやリソソームも含まれていると思います。この辺をうまく分ける術があるのかはよくわかりません。 しょう胞体もゴルジをどうするかなどで方法論が変わってくるかもしれません。ごるじをとったという文献は見たことがあるような気がします。

(無題) 削除/引用 No.3384-6 - 2014/09/19 (金) 14:54:56 - せみ >小胞体はmicrosome fractionをとってくるのがたいていと思います。 ちょうどウェスタン用に抽出したものがあるので、ついでに元素も計ってみたいと思います。 >葉緑体、液胞などが出てくると言う事は、植物細胞からの抽出でしょうか。 その通りです。 intactとかどうかは正直どう示せばいいのかも分かりません。 ただ、葉緑体を抽出してきて「葉緑体中のマグネシウムはこのぐらいの濃度です」という論文はいっぱいあると思います。 それは ・抽出作業中にイオンが流れだしたりしない ・buffer中に競合・対象元素が含まれていない。 ・葉緑体中の元素濃度がendogenousなものだとなんらかの方法で示している という条件を踏まているのだと思います。 とりあえずミクロソーム画分を計ってみて、栽培条件によって差があるか、教科書的な濃度と合致するか見たいと思います。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.3384-5 - 2014/09/19 (金) 11:09:33 - とれ >キットなどはありますが、intactで取れるとは思えず、 問題解決のためには、まず、この点を明らかにすべきかと思います。 intactで取れていること、取れていないこと、はどのように示すのでしょうか？ これだけで論文が書けそうな気もしますが…。 葉緑体、液胞などが出てくると言う事は、植物細胞からの抽出でしょうか。

(無題) 削除/引用 No.3384-4 - 2014/09/19 (金) 02:03:07 - おお 抽出の方法は各種いろいろ文献がありますのでキットでなくてもいいのではとおもいますが、、活性的にいんたくとなものは比較的抽出方法が確立していますが、目的に沿うものかよくわかりません。 小胞体はmicrosome fractionをとってくるのがたいていと思います。 パーコールやシュークロースで密度勾配でとってくるのがポピュラーかと思いますが。。。

(無題) 削除/引用 No.3384-3 - 2014/09/18 (木) 21:17:41 - せみ >質問の本来の答えとは異なりますが、細胞内小器官での元素解析でしたら、ＳＥＭのＥＤＸではいかがでしょうか？ それも考えたのですが、ウチではすぐにできないこと、対応する元素が限られることから諦めつつあります・・・ やはり元素特異的な色素で染めたりSEMを使うのがベストかも知れません。 ありがとうございます。

元素なら 削除/引用 No.3384-2 - 2014/09/18 (木) 15:45:55 - ema 質問の本来の答えとは異なりますが、細胞内小器官での元素解析でしたら、ＳＥＭのＥＤＸではいかがでしょうか？

できるだけintactな細胞小器官の抽出 削除/引用 No.3384-1 - 2014/09/18 (木) 15:09:25 - せみ お世話になっております。 細胞内小器官を出来るだけintactに抽出する方法はないかと考えております。 対象は小胞体、液胞、核などです。 タンパク質が欲しいだけならやりようがあるのですが、intactで取りたい理由はその小器官に存在する元素を定量したいためです。 マーカーやトレーサーを使うのも手ですが、できれば抽出して測れたらベストだと考えています。 キットなどはありますが、intactで取れるとは思えず、付属のbufferに含まれるカチオンも不明瞭なので代替品が作りにくいのです。 葉緑体は比較的簡単に抽出できると思いますが、小胞体などもどうにか抽出する方法をご存知のかた、教えて頂けませんか。

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