Bio Technical フォーラム

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Duolinkについて トピック削除
No.3389-TOPIC - 2014/09/19 (金) 13:48:30 - める
こんにちわ。

現在細胞内でタンパクの共局在を示すためにDuolinkというkitを使用しているのですが、プロトコール通りに行っても退色が非常に早く、撮影が満足にできない状況です。
Duolinkの感度自体はよいので、このkitを使っている方がいらっしゃいましたら退色を軽減する方法等ありましたら教えていただきたいです。
よろしくお願いいたします。
 
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一色だけ 削除/引用
No.3389-6 - 2014/09/26 (金) 10:07:07 - wwn
おおさん

私が使用したことがあるのはOrangeだけです。
蛍光の強度としては強いと思います。
このため場合によっては反応時間を考えないといけないと感じるくらいでした。
また、当てるレーザーパワーも抑えていますので退色が気にならなかったのかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.3389-5 - 2014/09/26 (金) 00:32:37 - おお
後学のために教えていただきたいことがあります。たしか2, 3色ほどオプションがありますが、どれが強そうでしょうか?またそれぞれの退色の具合はちがいますか?

試したことあります 削除/引用
No.3389-4 - 2014/09/24 (水) 10:19:03 - wwn
少し遅いレスですが
vectorshield width dapi で特に褪色が気にならなかったです。
ただ、マニキュアの影響があったのかGFPすら消えることがあったので
それ以降はマニキュアを使ってのカバーガラスの縁の処理はしていません。
また、キット付属のものを試していないので退色の違いは分かりません。

(無題) 削除/引用
No.3389-3 - 2014/09/21 (日) 15:03:22 - める
しさん

> 蛍光試薬で細胞を染めた後は退色防止剤入りの封入剤を使用していますが、この辺りは効果ありますかね??
> http://www.cosmobio.co.jp/product/detail/01340013_3.asp?entry_id=2918

sigmaに問い合わせてみたところ、kit付属の封入剤が最もDuolink In Situに適しており、他のものだと退色が早くなる恐れがあるためそれを使用するようにと指示されました。
実際に、私はdakoの封入剤を普段のIHCで使用していたので一応そちらでも試してみたところ、kit付属の封入剤よりも退色がさらに早く感じられました。
そちらで使用されている封入剤を試してからでもいいかもしれませんが、退色が早いようならこちらを使ってみてもいいかもしれませんね。

私も気になります 削除/引用
No.3389-2 - 2014/09/20 (土) 03:39:29 - し
同じ試薬を使おうと考えています。
先だって、duolinkを使用している方のご意見を伺いたいです。

蛍光試薬で細胞を染めた後は退色防止剤入りの封入剤を使用していますが、この辺りは効果ありますかね??
http://www.cosmobio.co.jp/product/detail/01340013_3.asp?entry_id=2918

Duolinkについて 削除/引用
No.3389-1 - 2014/09/19 (金) 13:48:30 - める
こんにちわ。

現在細胞内でタンパクの共局在を示すためにDuolinkというkitを使用しているのですが、プロトコール通りに行っても退色が非常に早く、撮影が満足にできない状況です。
Duolinkの感度自体はよいので、このkitを使っている方がいらっしゃいましたら退色を軽減する方法等ありましたら教えていただきたいです。
よろしくお願いいたします。

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